Evidencia de la actividad antifngica y antimicrobiana de bacterias cido lcticas en diversos sustratos fermentados para uso alimenticio

 

Evidence of the antifungal and antimicrobial activity of lactic acid bacteria in various fermented substrates for food use

 

Evidncia da atividade antifngica e antimicrobiana de bactrias lticas em vrios substratos fermentados para uso alimentar

 

Galo Insuasti C I
insuastig@yahoo.es
 https://orcid.org/0000-0002-6783-0485     
,Carlos Pilamunga C II
carlos.pilamunga@espoch.edu.ec
https://orcid.org/0000-0003-1262-864X
Janneth Mara Gallegos Nez III
jgallegos@espoch.edu.ec
 https://orcid.org/0000-0002-1550-8494     
,Ana Rafaela Pacurucu Reyes IV
apacurucu@espoch.edu.ec
 https://orcid.org/0000-0003-3539-9632
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


Correspondencia: insuastig@yahoo.es

 

 

Ciencias Tcnicas y Aplicadas

Artculo de Investigacin

* Recibido: 23 de diciembre de 2022 *Aceptado: 12 de enero de 2023 * Publicado: 22 de febrero de 2023

 

  1. Seguridad Alimentaria Grupo de Investigacin y Desarrollo SAGID, Facultad de Ciencias, Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador.
  2. Seguridad Alimentaria Grupo de Investigacin y Desarrollo SAGID, Facultad de Ciencias, Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador.
  3. Seguridad Alimentaria Grupo de Investigacin y Desarrollo SAGID, Facultad de Ciencias, Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador.
  4. Seguridad Alimentaria Grupo de Investigacin y Desarrollo SAGID, Facultad de Ciencias, Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador.

Resumen

Existen estudios que demuestran el potencial antimicrobiano y antifngico de las bacterias cido lcticas, en este contexto se puede considerar que estas bacterias manifiestan explcitamente los dos tipos de actividad en cualquier momento o circunstancia, particularidad que puede considerarse importante cuando se trata de ejecutar aplicaciones de las bacterias cido lcticas en el campo de los alimentos que son susceptibles a contaminacin por bacterias y hongos. Se realiz una revisin narrativa mediante bsquedas en las bases de datos Science Direct, Taylor and Francis Online, e-Libro, Scielo, PubMed y Redalyc, sin restricciones de fechas ni de tipos de estudio, en idiomas espaol e ingls, considerando tanto artculos completos como resmenes. De acuerdo con la evidencia existente, una explicacin para este comportamiento es la diversidad de metabolitos secundarios que simultneamente podran tener efectos antimicrobianos y antifngicos, adems, a nivel estructural el efecto antagnico sobre hongos y bacterias bsicamente se atribuye a su accin qumica sobre la composicin de la membrana celular. Las bacterias cido lcticas tienen una elevada importancia aplicativa que debera ser considerada en la fermentacin de alimentos para alcanzar una conservacin ptima. Las investigaciones especficas de distintos metabolitos generados de forma aislada o en grupo podran permitir la identificacin de posibles acciones sinrgicas.

Palabras Clave: bacterias cido lcticas; antagonismo; antifngico; antimicrobiano; alimentos fermentados.

 

Abstract

There are studies that demonstrate the antimicrobial and antifungal potential of lactic acid bacteria, in this context it can be considered that these bacteria explicitly manifest both types of activity at any time or under any circumstances, a particularity that can be considered important when it comes to executing applications of the lactic acid bacteria in the food field that are susceptible to contamination by bacteria and fungi. A narrative review was carried out through searches in the Science Direct, Taylor and Francis Online, e-Libro, Scielo, PubMed and Redalyc databases, without restrictions on dates or types of study, in Spanish and English, considering both complete articles as summaries. According to the existing evidence, one explanation for this behavior is the diversity of secondary metabolites that could simultaneously have antimicrobial and antifungal effects; moreover, at a structural level, the antagonistic effect on fungi and bacteria is basically attributed to their chemical action on the composition of the cell membrane. Lactic acid bacteria have a high application importance that should be considered in food fermentation to achieve optimum conservation. Specific investigations of different metabolites generated in isolation or in groups could allow the identification of possible synergistic actions.

Keywords: lactic acid bacteria; antagonism; antifungal; antimicrobial; fermented foods.

 

Resumo

Existem estudos que demonstram o potencial antimicrobiano e antifngico das bactrias lcticas, neste contexto pode-se considerar que estas bactrias manifestam explicitamente ambos os tipos de atividade a qualquer momento ou em qualquer circunstncia, uma particularidade que pode ser considerada importante quando se trata de realizando aplicaes de bactrias lticas na rea alimentcia que so susceptveis contaminao por bactrias e fungos. Foi realizada uma reviso narrativa por meio de buscas nas bases de dados Science Direct, Taylor and Francis Online, e-Libro, Scielo, PubMed e Redalyc, sem restries de datas ou tipos de estudo, em espanhol e ingls, considerando tanto os artigos completos quanto os resumos. De acordo com as evidncias existentes, uma explicao para esse comportamento a diversidade de metablitos secundrios que poderiam ter simultaneamente efeitos antimicrobianos e antifngicos; alm disso, em nvel estrutural, o efeito antagnico sobre fungos e bactrias atribudo basicamente sua ao qumica na composio da membrana celular. As bactrias do cido ltico tm uma alta importncia de aplicao que deve ser considerada na fermentao de alimentos para alcanar a conservao ideal. Investigaes especficas de diferentes metablitos gerados isoladamente ou em grupos podem permitir a identificao de possveis aes sinrgicas.

Palavras-chave: bactrias do cido lctico; antagonismo; antifngico; antimicrobiano; alimentos fermentados.

Introduccin

Las BAL (bacterias cido lcticas) actualmente son muy conocidas por su diversidad en relacin a bondades sobre la salud, su efecto probitico en los alimentos fermentados. Su utilidad es muy variada, existiendo un gran nmero de fundamentos que justifican sus aplicaciones y en el presente caso se busca revisar el efecto antifngico que pueda ser aplicado sobre los cereales y sus derivados.

La presencia de las BAL en los alimentos se considera seguro para el ser humano al tener comportamientos probiticos principalmente formadores de cido lctico y otros metabolitos que generan un ambiente inadecuado para el desarrollo de microorganismos patgenos en los alimentos fermentados.

La funcin probitica de las de bacterias lcticas est respaldado por amplios reportes cientficos que afirman este beneficio. (Ramrez et al., 2011).

La funcin de gneros de bacterias lcticas y otros microorganismos como probiticos ha despertado el inters de muchos investigadores, existiendo una gran cantidad de reportes cientficos que afirman los beneficios de los probiticos en la salud. (Ramrez et al., 2011).

Cada gnero y especie se describe utilizando un formato estandarizado, y se evala la importancia relativa de cada especie en aplicaciones alimentarias, agrcolas y mdicas. Adems, se brinda una cobertura detallada de ciertos grupos bacterianos (como Bifidobacterium) a menudo asociados con las BAL. (Holzapfel & Wood, 2014). En relacin a una aplicacin agrcola, (Drouin et al., 2022) refiere un estudio sobre ensilado de alfalfa inoculado con bacterias lcticas durante y despus del ensilaje, en el cual concluye una mejora en la produccin de compuestos antifngicos y reduccin del nmero de levaduras cultivables. Una evidencia adicional de las BAL con su efecto antifngico se observa en el estudio realizado por (Petkova et al., 2022), en el mismo que se menciona como potenciales responsables del efecto antifngico, a los metabolitos como el cido lctico, cido actico, etanol, dixido de carbono y bacteriocinas, en la bioconservacin de uvas de mesa premeditadamente contaminadas con Botrytis cinrea, al ser tratadas con cultivo de BAL del gnero Lactiplantibacillus, esta bacteria a ms de su efecto antifngico, muestra una actividad antimicrobiana como tambin lo menciona (Sun et al., 2022) en su estudio del rol de este microorganismo durante el almacenamiento anaerobio del maz extrado para la produccin de biogs.

Algunos grupos de gneros mencionados son: Lactococcus, Lactobacillus, Enterococcus, Streptococcus, Leuconostoc y Pediococcus, como productores de metabolitos que pueden ser: cidos orgnicos, sustancias preservantes, polisacridos, vitaminas, endulzantes, aromatizantes y saborizantes entre otros. (Parra Huertas, 2010). El autor (Liang et al., 2022) menciona como metabolitos antifngicos a los cidos grasos 10-OH 18: 1 y el acetato. Tambin se han caracterizado algunos dipptidos cclicos con efecto antifngico de Lacticaseibacillus paracasei ZX1231 para la elaboracin de pelculas en la conservacin de alimentos, segn Zheng cuatro dipptidos cclicos (CDP) fueron descubiertos del SFC (sobrenadante libre de clulas) elaborado, se encontraron ciclo (Phe-Leu) y ciclo(Antranilia-Pro) en la familia Lactobacillaceae por primera vez, que inhibieron la filamentacin de C. albicans al dirigirse a la va RAS1-cAMP-PKA. Las actividades antifngicas del SFC se combinaron de manera ptima con una matriz de nanocelulosa bacteriana (BNC) para preparar las pelculas (Zheng et al., 2022).

El deterioro por hongos es una de las principales causas de importante prdida econmica en la industria de la panificacin y en general en almacenamiento de cereales, particularmente se menciona como un factor influyente en esta industria. Las esporas de los hongos que estn en la materia prima son el resultado de la contaminacin de los mohos transportados a travs del aire del ambiente, situacin que se convierte en un problema en cualquier fase del procesamiento de cereales. El calor aplicado durante un horneo se menciona que puede eliminar a los hongos, investigativamente el efecto del calor ha sido estudiada con la influencia de un extracto de bacterias lcticas con actividad antifngica (Lactobacillus plantarum CRL 778) a diferentes tiempos de tratamiento con el objetivo de eliminar la presencia de hongos y sus esporas. (Gerez et al., 2015).

El efecto del calor si bien es cierto es un factor que va a eliminar hongos o esporas en los cereales procesados, stos en su estado ms natural son proclives a la presencia de estos microorganismos, en su estado natural se sugiere buscar alternativas para su eliminacin, por ejemplo, la utilizacin de bacterias del gnero Bacillus en el control biolgico de los hongos fitopatgenos de enfermedades fngicas, el control se lo atribuye a metatobolitos con actividad antifngica. Se han utilizado aislados del gnero Bacillus con efecto antagnico sobre hongos fitopatgenos en cultivos de arroz. (Tejera et al., 2012).

Cepas de Bacillus muestran un efecto antagnico sobre Fusarium fitopatgeno en cultivos hortcolas. Un ensayo sobre antagonismo en un periodo de siete das menciona inhibicin por parte de Bacillus sobre Foxisporum, este hongo es inhibido por encima del 80 % y frente a F. moniliforme supera la inhibicin de crecimiento sobre el 50 %. (Bada et al., 2017).

Tambin se reporta el antagonismo (es la inhibicin, deterioro o muerte de un microorganismo por accin de otro, (Prez-y-Terrn et al., s. f.)) de Bacillus spp sobre hogos fitopatgenos en cultivos de arroz, estudio de mucha importancia al considerarse que el arroz es un alimento de elevada demanda en el mercado, en un trabajo se utiliz siete aislados del gnero Bacillus para observar el efecto antagnico sobre los hongos fitopatgenos en el cultivo de arroz. Se obtuvieron altos porcentajes de inhibicin del crecimiento de los hongos con todos los aislados de Bacillus estudiados y se determin que a los siete das se observan los mayores porcentajes de inhibicin del crecimiento para los hongos empleados bajo las condiciones de laboratorio utilizadas. (Tejera et al., 2012).

Los aislados de BAL muestran actividad toxignica inhibitoria contra el A. flavus toxignico. El ensayo in vitro revel una disminucin notable en la cantidad de aflatoxina B1 (AFB1) y B2 (AFB2)- micotoxinas (sustancias qumicas producidas por cepas toxignicas de hongos: Aspergillus flavus y Aspergillus parasiticus (Bogantes- Ledezma et al., 2004)), en mijo y sorgo contaminados tratados con monocultivo y cocultivo BAL, respectivamente. (Ibitoye et al., 2021).

El reino fungi se caracteriza por contaminar productos alimenticios, creando la necesidad de utilizar aditivos sintticos que son de suma preocupacin para los consumidores en relacin a su seguridad, en este contexto ha surgido la iniciativa de utilizar agentes naturales provenientes de microorganismos (BAL) y otros que estn dirigidos a proteger o conservar los alimentos. Esta utilidad de sustancias naturales es considerada como un biocontrol en la proliferacin de hongos y de ese modo se consigue evitar la descomposicin de los alimento por el reino fungi. (Ribes et al., 2018).

Sobre el efecto antimicrobiano y antifngico o antagonismo de las BAL se dan varias explicaciones desde el punto de vista mecanstico que permiten entender el efecto considerado como biocontrol por parte de los diversos metabolitos producidos por las BAL. Algunos de los efectos que se mencionan son: disrupcin del metabolismo celular (cido lctico), inactivacin de biomolculas por reaccin en cadena de aniones superxido y activacin del sistema lactoperoxidasa (perxido de hidrgeno), inhibicin de decarboxilacin enzimtica (dixido de carbono), interferencia de utilizacin de arginina (diacetilo), disrupcin de la membrana citoplamtica (bacteriocinas-pptidos sintetizados por algunas bacterias cido lcticas.(Preciado et al., 2013), (Beristain-Bauza, 2012)). Los gneros de BAL ms estudiadas en relacin a su actividad antifngica se menciona a Lactobacillus, Pediococus y Leuconostoc. (Olivares Tenorio & Klotz Ceberio, 2020).

El mecanismo antagnico observado de las BAL sobre los hongos se centran en aspectos mencionados como: la capacidad para daar biomembranas por interferencias sobre la smosis de la interaccin de la caractersticas lipoflicas de las biomembranas con las enzimas presentes en las mismas. Con relacin al efecto antimictico se menciona que ciertas protenas y polipptidos actan degradando polmeros de la membrana celular, alterando los ribosomas e inhibiendo la sntesis de ADN. (Montes-Belmont, 2009).

Los cereales y pseudocereales son adecuados para fermentaciones microbianas debido a su contenido en polisacridos que sirven como fuente de carbono y energa para microorganismos durante la fermentacin. Tambin son ricos en minerales, vitaminas y otros factores de crecimiento.

Se ha observado que los cereales se relacionan aplicativamente con las BAL, algunas de las cuales procedemos a mencionar: bebidas a base de cereales que pueden ser mejoradas en su calidad, generacin de nutrientes funcionales e ingredientes alimentarios a partir de las BAL. El proceso fermentativo es catalogado como seguro, econmico, adecuado como conservante natural y generador de caractersticas como textura, sabor, aroma y ayuda en los procesos de nutricin. Segn lo expresado anteriormente un cultivo iniciador de BAL con cereales es necesario optimizarlo para conseguir cepas con caractersticas bioconservantes desde elaborados alimenticios de cereales, adicionalmente se sumara otras caractersticas como antifngicas, atimicotoxnicas, que permitirn neutralizar pptidos txicos y generar aminocidos, oligosacridos que permitiran formar alimentos funcionales prebiticos que podran competir con productos lcteos existentes. (Waters et al., 2015).

Existe el inters de identificar y aislar cepas de BAL desde cereales y otras partes de vegetales para aprovecharlos tecnolgicamente de distintas formas, tal es as que fermentos de yuca y granos de maz han sido estudiados encontrndose cepas de algunas bacterias que han manifestado mejor y rpida produccin de cido (Lactobacillus plantarum), produccin lenta de cido (L. fermentum), produccin de perxido de hidrgeno, actividad amilcea (L. pentosus), actividad β-glucosidasa (Lactobacillus plantarum y L. fermentum). (Sanni et al., 2013).

Se ha estudiado una mezcla de harina de cebada fermentada con residuos de merluza (Merluccius hubbs), se utiliz cido lctico como una muestra comparativa, y en las muestras biolgicas se observ disminucin de pH mantenindose la fermentacin estable hasta el final. En el experimento se observ otros aspectos en esta mezcla, como: el aumento de la concentracin de pptidos y la concentracin de fsforo aumentaron en los biosilos, mientras que en el control los valores se mantienen casi estables. Con relacin a la tripsina la actividad inhibitoria se suprimi en ambos biosilos, mientras que en el control los factores anti nutricionales siguen siendo activos de ah que se puede observar la posibilidad de una eficacia como inoculante sobre silos. (Marguet et al., 2017).

Una aplicacin organolptica relacionada con las BAL se describe en su influencia sobre la textura y el sabor de los fideos de arroz de un alimento tradicional chino fundamentado en la actividad fermentativa no controlada de las bacterias cido lcticas, se identificaron siete especies de Lactobacillus: Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus salivario, Lactobacillus helvtico, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus fermento, Lactobacillus. amylovorus y Lactobacillus Oris. (Li et al., 2015).

Otra aplicacin de las BAL es en la elaboracin de mltiples bebidas, particularmente se menciona una bebida elaborada a partir de harina de arroz y una oleaginosa como el ajonjol con cultivos probiticos, con la finalidad de conseguir buena aceptabilidad organolptica y caractersticas nutricionales. Para realizar combinaciones entre cereales y oleaginosas u otros se utiliza el software Desing Expert 6.01 que procesa variables como harina de arroz, ajonjol tostado, agua, azcar como edulcorante, carboximetilcelulosa como estabilizante. Al final de la elaboracin de la bebida se valora aspectos de estabilidad, aceptabilidad, composicin nutricional y calidad microbiolgica. Se ha usado glucosa como sustrato fermentable de microorganismos como Lactobacillus acidophilus y Lactobacillus casei. (Hernndez-Monzn et al., s. f.).

 

Aplicaciones

La aplicacin ms comn de las BAL es la fermentacin con la finalidad de elaborar bebidas alimenticias o elaborados slidos con cereales u otros grupos de alimentos manifestando actividad conservante en las distintas presentaciones alimenticias, actividad fundamentada en su efecto antagnico para con los hongos que frecuentan a las materias primas. A continuacin, se muestra algunas aplicaciones de las bacterias cido lcticas.

 

Tabla 1: Algunas aplicaciones de BAL en alimentos relacionados con cereales.

BACTERIA LCTICA

FUENTE DE BACTERIAS

APLICACIN

REFERENCIA

FUENTE CONSULTADA

Bifidobacterium

 

Generacin de caractersticas organolpticas.

Aplicacin como prebitico.

(Holzapfel & Woo D, 2014)

Lactic Acid Bacteria: Biodiversity and Taxonomy

Lactococcus, Streptococcus, Pedicococcus, Vagococcus y algunos lactobacilos

Alimentos fermentados.

Probitico.

Fermentacin lctica. Generacin de caractersticas organolpticas. Medio de crecimiento.

(Ramrez et al., 2011)

Bacterias lcticas: Importancia en alimentos y sus efectos en la salud

Lactococcus, Lactobacillus, Enterococcus, Streptococcus, Leuconostoc y Pediococcus

Alimentos fermentados

Preservantes.

Mejoradores de caractersticas organolpticas.

(Parra Huertas, 2010)

Review. bacterias acido lcticas: papel funcional en los alimentos

Lactobacillus plantarum

Productos de panificacin

Almacenamiento de cereales

Antifngico

(Gerez et al., 2015)

1.     Cultivo iniciador antifngico para pan envasado: influencia de dos condiciones de almacenamiento

Gnero Bacillus

Cultivos de arroz

Antifngico

(Tejera et al., 2012)

Antagonismo de Bacillus spp. frente a hongos fitopatgenos del cultivo del arroz (Oryza sativa L.)

Gneros de Bacillus.

Cultivos hortcolas

Antifngico

(Bada et al., 2017)

Antagonismo de Bacillus frente a hongos fitopatgenos de cultivos hortcolas

Aislados de bacterias cido lcticas.

Cereales contaminados artificialmente

Inhibicin de A. flavus toxignico

(Ibitoye et al., 2021)

Bacterias del cido lctico biodesintoxicando aflatoxinas con cereales contaminados, mejoran los efectos toxicolgicos y mejoran los parmetros hematohistolgicos en ratas albinas

BALs y sus metabolitos asociados a partes vegetales.

Varias fuentes (Revisin)

Incorporacin de BAL en emulsiones y nanoemulsiones de aceite en agua, pelculas comestibles y envases activos combinados con conservantes naturales para mejorar su eficacia antifngica.

(Ribes et al., 2018)

Prevencin del deterioro fngico en productos alimenticios que utilizan compuestos naturales: una revisin

Cepas de L. casei, L. rhamnosus, Propionibacterium freudenreichii

Bacterias lcticas del listado europeo de seguridad QPS

Evaluacin antifngica.

(Olivares Tenorio & Klotz Ceberio, 2020)

Evaluacin del efecto antifngico de metabolitos de cultivos bioprotectores: aplicacin en derivados lcteos

Cultivos iniciadores de BALs

Diversas fuentes (Revisin)

Asociacin de BAL, para la biopreservacin antifngica, antimicotoxinas en bebidas de cereales.

(Waters et al., 2015)

Bacterias del cido lctico como una fbrica celular para la entrega de biomolculas e ingredientes funcionales en bebidas a base de cereales: una revisin

Cepas de Lactobacillus plantarum, L. Pediococcus, L. fermentum

Cepas puras

Fermentacin lctica de granos de yuca y maz (fufu y ogi).

(Sanni et al., 2013)

Caracterizacin y propiedades tecnolgicas de Bacterias cido lcticas en la Sorghurt, elaborado a base de cereal

Biosilo: Lactococcus lactis Tw34 y Lactobacillus plantarum Lb7

Subproductos de merluza

Inoculacin de microorganismos para la fermentacin de residuos de merluza y harina de cebada.

(Marguet et al., 2017)

Biosilo de residuos de merluza y harina de cebada fermentados con bacterias cido lcticas seleccionadas

Lb. delbrueckii, Lb. salivarius, Lb. helveticus, Lb. reuteri, Lb. fermentum, Lb. amylovorus and Lb. oris,

Fideos fermentados de arroz

Preparacin de comida tradicional a partir de fermentacin de fideos de arroz fresco.

(Li et al., 2015)

Diversidad de bacterias cido lcticas de fideos de arroz fresco durante el proceso de fermentacin, reveladas por mtodos de cultivos dependientes e independientes

Lactobacillus acidophilus y Lactobacillus casei

Cepas puras

Elaboracin de una bebida fermentada a base de harina de arroz combinada con ajonjol.

(Hernndez-Monzn et al., s. f.)

Desarrollo de una bebida elaborada con harina de arroz y ajonjol (Sesamum indicum) y fermentada con cultivos probiticos

 

 

Mtodos de fermentacin y antagonismo

A continuacin, se expone algunas metodologas relacionadas con la aplicacin de las BAL en distintos productos alimenticios elaborados con diferentes propsitos.

Para el trabajo que busca evaluar el efecto antifngico en pan elaborado y tratado con un biopreservante de Lactobacillus Plantarum bajo dos condiciones de almacenamiento, se prepar adecuadamente (Gerez et al., 2015) un biopreservante a partir Lactobacillus paltarum del centro de referencia para lactobacillus (CERELA), Tucumn Aragentina, codificado como SL778 y se defini su conservacin (4 C o 20 C, usando caldo RMS). El biopreservante fue colocado en una mezcla de harina de trigo, leche descremada en polvo, levadura, sacarosa y agua, dejando fermentar la masa a 37C por 16 horas, comparativamente con un testigo. De las muestras fermentadas se analiz cidos orgnicos mediante HPLC (Sistema isocrtico con H2SO4 5mmol/L a un flujo de 0.6 mL/min en una columna Biorad de 30 mm a una temperatura de 45C), buscando cuantificar cido lctico y acetato, mediante detector de ndice de refraccin y cido fenil actico usando detector UV-210 nm). Se procedi a elaborar pan para determinar en la superficie de rodajas la presencia de hongos en tiempos de siete y catorce das, finalizando con una evaluacin sensorial del pan elaborado. Esta metodologa tiene la finalidad de involucrar en el proceso de elaboracin del pan, la influencia de una bacteria lctica sobre el crecimiento de hongos y la eficacia del biopreservante de Lactobacillus palntarum.

La metodologa de cultivo dual descrita por Bashan, referido por Tejera es utilizada para estudiar el antagonismo de Bacillus spp. sobre hongos fitopatgenos en el cultivo del arroz (Oryza sativa L.) (Tejera et al., 2012). Los hongos fitopatgenos se siembran en PDA (OXOID) y se incuban durante siete das a 30 C. Los aislados bacterianos se sembraron por 24 horas en Caldo Nutritivo en condiciones de agitacin en zaranda orbital (150 rpm, 30C), se ajusta la concentracin celular a 108 cel/mL basados como referencia en un tubo de 0.5 de la escala Mc Farland para inocular superficialmente por diseminacin de 100 μl de esta suspensin bacteriana en placas Petri de 100 mm que contiene medio PDA. Se extrae con un obturador de 5 mm de dimetro un fragmento de hongo crecido y se coloca en el centro de las placas inoculadas con aislados bacterianos, las mismas que se incubarn a 30 C. La metodologa contempla tres rplicas por cada aislado. En un tiempo de 7 a 11 das el efecto antagnico de los aislados bacterianos se determina midiendo el dimetro del crecimiento del hongo fitopatgeno en las placas que contienen el antagonista bacteriano, simultneamente se ejecut un control negativo donde se encontraban nicamente los hongos. El clculo del porcentaje de inhibicin se realiza con la ecuacin siguiente:

 

Porcentaje de inhibicin = ((D.C.C D.C.P)/D.C.C) * 100, dnde:

D.C.C: dimetro de la colonia control.

D.C.P: dimetro de la colonia del hongo en interaccin con las bacterias.

 

Para la bio-desintoxicacin de aflatoxinas generadas por Aspergillus flavus toxignico, se aplic un ensayo invitro utilizando monocultivo y cocultivo de BAL para disminuir la cantidad de aflatoxina B1 (NF-1) y B2 (NF-2) en cereales premeditadamente contaminados. La efectividad biodesintoxicante de las BAL se determina mediante parmetros hematolgicos y toxicidad en el hgado en ratas albinas. (Ibitoye et al., 2021).

Para la Evaluacin del efecto antifngico de metabolitos de cultivos de bacterias lcticas como bioprotectores, se ejecuta una metodologa comenzando con el aislamiento e identificacin de especies alterantes, posteriormente se selecciona los cultivos bioprotectores para las pruebas de antagonismo para realizar ensayos con productos celulares bioprotectores elaborados. La capacidad antifngica de los productos celulares bioprotectores se determin controlando el crecimiento del hongo alterante (medio agar yogur inoculado con los hongos alterantes), ensayando la inhibicin (medio agar yogur adicionado en profundidad con los distintos productos celulares a ensayar e inoculadas con los hongos alterantes) y Controlando la contaminacin (medio agar yogur adicionado de los productos a ensayar). (Olivares Tenorio & Klotz Ceberio, 2020).

La posibilidad de inactivar enzimas y en particular la tripsina como tambin bloquear hipotticamente reacciones bioqumicas por parte de las BAL se puede apreciar en un estudio existente sobre la capacidad inoculante del formado por Lacttobacillus lactis TW34 y Lactabacillus plantarum Lb7, donde el sustrato para proliferacin fue un subproducto de merluza combinado con harina de cebada fermentado por 7 das. La capacidad inoculante del biosilo fue valorada detectando fsforo libre, fracciones proteicas, actividad inhibitoria de tripsina. El Fsforo libre se menciona que fue detectado segn la tcnica espectrofotomtrica descrita por Fiske y Subarow. Las concentraciones de fracciones proteicas aisladas se determinaron con la tcnica de o-ftaldialdehdo. La actividad inhibitoria de tripsina sobre la casena bajo la influencia de las muestras de biosilo se midi con la frmula sugerida por Liu y Markanis, previa inhibicin de la tripsina con TCA. (Marguet et al., 2017).

En lnea de conseguir BAL para diversas aplicaciones existe un estudio para identificarlas en fideos de arroz fermentados de forma natural utilizados en la alimentacin tradicional China, para el aislamiento e identificacin de los microrganismos se utiliz la reaccin en cadena de la polimerasa, la electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante (PCR-DGGE- polymerase chain reaction denaturing gradient gel electrophoresis). (Li et al., 2015).

Los granos de cereales dependiendo de las condiciones ambientales siempre estaran predispuestos a ser invadidos por hongos, esta particularidad exige siempre almacenarlos tcnicamente para evitar el dao que provocaran ellos. Una alternativa mediata podra considerarse el procesamiento de ellos para genera elaborados alimenticios fermentados, utilizando bacterias lcticas, en este contexto existe un estudio de la elaboracin de una bebida fermentada utilizando probiticos a base de arroz y ajonjol tostado que ha sido evaluada en aceptabilidad, composicin nutricional, acidez, pH, viscosidad, calidad microbiolgica, viabilidad de los probiticos y estabilidad durante el almacenamiento (Hernndez-Monzn et al., s. f.). En la misma lnea expresada anteriormente se presenta la opcin de otro elaborado conocido como "sorgo" (Sanni et al., 2013) un producto a base de un cereal y tubrculo. Se caracterizan y establecen propiedades tecnolgicas de las bacterias cido lcticas obtenidas de la fermentacin de granos de yuca y maz para fufu y ogi, la identificacin se realiza utilizando mtodos fenotpicos y genmicos de huellas dactilares como rep-PCR y ARDRA y secuenciacin del gen 16S rDNA. Las propiedades tecnolgicas consideradas son acidez, produccin de perxido de hidrgeno, hidrlisis del almidn, actividades enzimticas, degradacin de oligosacridos y propiedades de adherencia in vitro. (Sanni et al., 2013).

 

 

Resultados y razonamientos

En la presente revisin se ha podido detectar un sinnmero de resultados como evidencias en aspectos relacionados con el antagonismo de BAL sobre hongos en cereales y elaborados, fermentacin de alimentos frescos y obtencin de elaborados probiticos de los mismos, el efecto conservante sobre los alimentos. A continuacin, se sintetizan los resultados de los diversos trabajos revisados.

 

Tabla 2: Compendio de resultados de trabajos revisados.

RESULTADOS REPORTADOS

TTULO DEL TRABAJO

AUTOR

Las aplicaciones reportadas sobre alimentos son:

-       Uso de BAL en ensilados forrajeros y en ensilaje de pescado.

-       Bacterias lcticas como probiticos benficos.

 

-       Los efectos benficos reportados en la salud son:

-       Mantenimiento de la flora intestinal y tratamiento de problemas digestivos.

-       Modulacin del sistema inmunolgico.

-       Reduccin de cncer de colon.

-       Usos en intolerancia a la lactosa.

-       Disminucin de colesterol srico.

-       Posibles usos en hipertensin.

Bacterias lcticas: Importancia en alimentos y sus efectos en la salud.

(Ramrez et al., 2011)

Con relacin al papel funcional de las BAL en los alimentos se menciona lo siguiente:

-       Produccin de cidos orgnicos como: cido lctico, acetaldehdo, cido propinico.

-       Efecto antimicrobiano de perxido de hidrgeno y bateriocinas.

-       Formacin de sabores y olores.

-       Produccin de endulzantes (manitol, sorbitol).

-       Produccin de vitaminas (complejo B).

Review. Bacterias acido lcticas: papel funcional en los alimentos.

(Parra Huertas, 2010)

Se desarrolla un bio-conservante designado como SL778 para utilizarlo en panificados envasados. Se mantiene estable su capacidad antifngica durante catorce das de almacenamiento a 4 C o a -20 C, a pesar de que a los siete das disminuyen los cidos orgnicos.

2.     Cultivo iniciador antifngico para pan envasado: influencia de dos condiciones de almacenamiento.

(Gerez et al., 2015)

Se utilizaron aislados pertenecientes al gnero Bacillus para evaluar su efecto antagnico a los siete y once das sobre dos hongos fitopatgenos del cultivo de arroz, determinando el porcentaje de inhibicin del crecimiento de los dos hongos. A los siete das se observ el mayor porcentaje de inhibicin del crecimiento in vitro de hongos.

Antagonismo de Bacillus spp. frente a hongos fitopatgenos del cultivo del arroz (Oryza sativa L.).

(Tejera et al., 2012)

Catorce aislados de Bacillus mostraron antagonismo frente a F. oxysporum, se observ que el 64 % de las bacterias de Bacillus presentaron una inhibicin del hongo por encima del 80 % a los siete y quince das de incubacin, atribuyendo el efecto antagnico a la presencia entre otros de la Subtilina generada por B. subtilis.

En un experimento adjunto se ensay sobre F. moniliforme, observndose un efecto antagnico por parte del 14 % de cepas con un 50% de inhibicin.

Los resultados muestran un elevado potencial antagnico de los distintos aislados bacterianos sobre F. oxysporum y F. moniliforme, fitopatgenos hortcolas, abriendo la potencialidad de las bacterias lcticas para el control biolgico de hongos.

Antagonismo de Bacillus frente a hongos fitopatgenos de cultivos hortcolas.

(Bada et al., 2017)

Las bacterias cido lcticas pueden biodesintoxicar aflatoxinas, mejorando los efectos toxicolgicos y sustentndolos con parmetros hematohistolgicos en ratas albinas. Los aislados de BAL inhibieron a A. flavus toxignico, inhibicin sustentada in-vitro al observar una disminucin considerable en la cantidad de aflatoxina B1 (AFB1) y B2 (AFB2) en mijo y sorgo contaminados tratados con monocultivo y cocultivo de BAL. El efecto txico de las aflatoxinas en los hgados de las ratas albinas alimentadas se mejor con el tratamiento de cereales contaminados con BAL.

Bacterias del cido lctico biodesintoxicando aflatoxinas con cereales contaminados, mejoran los efectos toxicolgicos y mejoran los parmetros hematohistolgicos en ratas albinas.

(Ibitoye et al., 2021)

El efecto antifngico de metabolitos fue evaluado con cultivos bioprotectores sin y con tratamiento trmico en modelos lcteos como agar yogur, observndose un resultado de acuerdo con una escala cualitativa de crecimiento fngico.

-       Cepas de BAL presentaron diferente funcionalidad bioprotectora.

-       El tratamiento con temperatura elimin sustancialmente el poder antifngico.

Evaluacin del efecto antifngico de metabolitos de cultivos bioprotectores: aplicacin en derivados lcteos.

(Olivares Tenorio & Klotz Ceberio, 2020)

Se mencionan como metabolitos antifngicos a los cidos grasos 10-OH 18: 1 y el acetato.

Antifungal cultures and metabolites of lactic acid bacteria for use in dairy fermentations

(Liang et al., 2022)

Los dipptidos cclicos mencionados con actividad antifngica son: ciclo (Phe-Leu) y ciclo (Antranilia-Pro, que inhibieron la filamentacin de C. albicans al dirigirse a la va RAS1-cAMP-PKA. Las actividades antifngicas del SFC (sobrenadante libre de clulas) elaborado, se combinaron de manera ptima con una matriz de nanocelulosa bacteriana (BNC) para preparar pelculas bioprotectoras.

Characterization of antifungal cyclic dipeptides of Lactcaseibacillus paracasei ZX1231 and active packaging film prepared with its cell-free supernatant and bacterial nanocellulose

(Zheng et al., 2022)

Si bien es cierto las BAL estn justificadas en alto grado en su capacidad antifngica, se observa que plantas superiores pueden permitir formar fungicidas naturales basados en mltiples metabolitos originados de procesos coevolutivos desarrollados como sistemas de defensa frente a hongos.

Diversidad de compuestos qumicos producidos por las plantas contra hongos fitopatgenos.

(Montes-Belmont, 2009)

Al caracterizar y establecer propiedades tecnolgicas sobre un elaborado a base de ceral (Sorghurt), se estableci que la capacidad de produccin de cido es mayor con cepas de Lactobacillus plantarum, seguido de cepas Pediococcus y una produccin ms lentas de las cepas de L. fermentum. La actividad β glucosidasa es mayor para L. Pentosus L. Plantarum y L. fermentum.

Caracterizacin y propiedades tecnolgicas de Bacterias cido lcticas en la Sorghurt, elaborado a base de cereal.

(Sanni et al., 2013)

Se ha determinado la posibilidad de utilizar residuos de merluza y harina de cebada fermentados con BAL determinando la disminucin del pH con un crecimiento significativo de bacterias lcticas como Lactococus lactis y Lactobacillus paltarum, que pueden llegar a cubrir casi la exclusividad de la microbiota del ensilado, provocando la disminucin de microorganismos que pueden actuar como patgenos o deteriorantes.

Biosilo de residuos de merluza y harina de cebada fermentados con bacterias cido lcticas seleccionadas.

(Marguet et al., 2017)

Los fideos de arroz han sido sujetos de investigacin durante el proceso de su fermentacin consultando la diversidad de bacterias cido lcticas generadas mediante anlisis de secuencias de rRNA 16S con perfiles de electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante (DGGE).

Diversidad de bacterias cido lcticas de fideos de arroz fresco durante el proceso de fermentacin, reveladas por mtodos de cultivos dependientes e independientes.

(Li et al., 2015)

La bebida elaborada con harina de arroz y ajonjol han mostrado ser adecuadas para fermentacin con BAL, pues a distintos tiempos se observa incremento de acidez o disminucin de pH acompaado de una buena conservacin sustentada en el procedimiento adecuado de formulacin y fermentacin. Se ha visto una buena conservacin hasta 20 das con aceptabilidad considerable. Resultado que justificara haber alcanzado un elaborado con caractersticas probiticas.

Desarrollo de una bebida elaborada con harina de arroz y ajonjol (Sesamum Indicum) y fermentada con cultivos probiticos.

(Hernndez-Monzn et al., s. f.)

 

 

Conclusin

La informacin recabada muestra una importante evidencia de las propiedades antibacterianas y antifngicas de las bacterias cido lcticas, atribuidas principalmente a la gran variedad de metabolitos que generan, sin especificarse el mecanismo de accin individual de stos por lo que se precisan estudios a este nivel.

Existe abundante informacin sobre el uso de bacterias lcticas como probiticos en la fermentacin de sustratos alimenticios y la elaboracin de alimentos, en este contexto, una alta variedad de sustratos naturales y elaborados resultaran idneos para cultivar bacterias lcticas que adems de sus propiedades probiticas podran ser utilizadas como antibacterianas y antifngicas, lo que les da el carcter de ser promisorias.

 

Agradecimientos

Los autores agradecen el apoyo financiero provisto por la Facultad de Ciencias de la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, en el Proyecto Evaluacin invitro de la bioactividad antifgica y como estimulante del crecimiento vegetal de bacterias cido lcticas, ejecutado por el grupo de investigacin SAGID.

 

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