���������������������������������������������������������������������������������

 

Obtenci�n, caracterizaci�n y aplicaci�n de Quitosano en alimentos industrializados para consumo de ganado lechero

 

Obtaining, characterizing and application of chitosan in industrialized foods for dairy cattle consumption

 

Obten��o, caracteriza��o e aplica��o de quitosana em alimentos industrializados para consumo de gado leiteiro

 

�

Sonia Elisa Pe�afiel-Acosta ^I

sonia.penafiel@espoch.edu.ec

https://orcid.org/0000-0002-1658-8596

 

Guido Gonzalo Brito-Z��iga ^II

guido.brito@espoch.edu.ec

https://orcid.org/0000-0003-3467-9309

 

Carmen Alicia Zavala-Toscano ^III

alicia.zavala@espoch.edu.ec

https://orcid.org/0000-0003-0720-3479

 

Vanessa Pamela P�rez-Pazmi�o ^IV

vperez@espoch.edu.ec

https://orcid.org/0000-0002-0275-2295

Correspondencia: sonia.penafiel@espoch.edu.ec

 

Ciencias sociales y pol�ticas �

Art�culo de investigaci�n

��������������������������������������������������������

*Recibido: 05 de julio de 2020 *Aceptado: 20 de agosto 2020 * Publicado: 07 de septiembre de 2020

 

        I.            Doctora en Qu�mica. Master en Protecci�n Ambiental. Docente Investigadora Escuela Superior Polit�cnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador.

      II.            Doctor en Qu�mica. Master en Protecci�n Ambiental. Docente Investigador. Escuela Superior Polit�cnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador.

   III.            Bioqu�mica Farmac�utica. T�cnica del laboratorio de Bromatolog�a. Escuela Superior Polit�cnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador

    IV.            Estudiante de la Facultad de Ciencias Pecuarias. Escuela Superior Polit�cnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador

�

Resumen

El quitosano es un pol�mero natural que ha sido desaprovechado y su importancia radica en los diferentes usos que se le puede atribuir. En el presente estudio se utiliza quitosano extra�do mediante hidr�lisis �cido-base, el mismo es caracterizado mediante cromatograf�a de gases para valorar su composici�n aminoac�dica; para su posterior aplicaci�n en un alimento balanceado de referencia. Comparando el contenido nutricional amino�cidico, los balanceados sin quitosano (t0) y enriquecido con quitosano (t1), en el mismo se evidencia el incremento porcentual de ciertos amino�cidos. En la metodolog�a de estudio el t1 es el tratamiento al que se aplica quitosano al 1.5 % en relaci�n al alimento, es decir 3g de quitosano en 200g de balanceado para dosificar la cantidad, se debe tomar en cuenta los siguientes est�ndares m�n. De prote�na 13%, humedad m�x 13%, grasa m�n 2.5%, m�x. Fibra cruda 15%, m�x. Cenizas 8% seg�n datos bibliogr�ficos.�

El an�lisis de su composici�n nutricional se realiz� por espectroscopia ir � cercano (nirs) y por cromatograf�a de gases para evaluar la composici�n amino�cidico del alimento enriquecido. Evidentemente el t1 frente al t0 presenta un incremento en porcentaje en amino�cidos esenciales como: metionina, lisina, histidina fenilalanina, siendo estos responsables de diversos procesos como la s�ntesis de prote�nas de los tejidos y la leche, o la s�ntesis de otros metabolitos corporales. El incremento de metionina fue del 0.63% y de lisina de 2.6% estos amino�cidos se podr�an relacionar con el rendimiento del hato para producir concentraciones m�ximas de prote�na de la leche.

Palabras Claves: quitina; quitosano; derivatizaci�n; amino�cidos esenciales

 

Abstract

Chitosan is a natural polymer that has been wasted and its importance lies in the different uses that can be attributed to it. In the present study, chitosan extracted by acid-base hydrolysis is used, it is characterized by gas chromatography to assess its amino acid composition; for subsequent application in a reference balanced food. Comparing the nutritional amino acid content, those balanced without chitosan (t0) and enriched with chitosan (t1), the percentage increase in certain amino acids is evidenced. In the study methodology, t1 is the treatment to which 1.5% chitosan is applied in relation to the food, that is, 3g of chitosan in 200g of balance to dose the amount, the following min. Standards must be taken into account. Protein 13%, humidity max 13%, fat min 2.5%, max. Crude fiber 15%, max. Ashes 8% according to bibliographic data.

The analysis of its nutritional composition was carried out by near-ir spectroscopy (nirs) and by gas chromatography to evaluate the amino acid composition of the enriched food. Obviously, t1 versus t0 presents an increase in percentage in essential amino acids such as: methionine, lysine, histidine phenylalanine, these being responsible for various processes such as the synthesis of proteins in tissues and milk, or the synthesis of other body metabolites. The increase in methionine was 0.63% and lysine 2.6%. These amino acids could be related to herd performance to produce maximum concentrations of milk protein.

Keywords: chitin; chitosan; derivatization; essential amino acids

 

Resumo

Chitosan is a natural polymer that has been wasted and its importance lies in the different uses that can be attributed to it. In the present study, chitosan extracted by acid-base hydrolysis is used, it is characterized by gas chromatography to assess its amino acid composition; for subsequent application in a reference balanced food. Comparing the nutritional amino acid content, those balanced without chitosan (t0) and enriched with chitosan (t1), the percentage increase in certain amino acids is evidenced. In the study methodology, t1 is the treatment to which 1.5% chitosan is applied in relation to the food, that is, 3g of chitosan in 200g of balance to dose the amount, the following min. Standards must be taken into account. Protein 13%, humidity max 13%, fat min 2.5%, max. Crude fiber 15%, max. Ashes 8% according to bibliographic data.

The analysis of its nutritional composition was carried out by near-ir spectroscopy (nirs) and by gas chromatography to evaluate the amino acid composition of the enriched food. Obviously, t1 versus t0 presents an increase in percentage in essential amino acids such as: methionine, lysine, histidine phenylalanine, these being responsible for various processes such as the synthesis of proteins in tissues and milk, or the synthesis of other body metabolites. The increase in methionine was 0.63% and lysine 2.6%. These amino acids could be related to herd performance to produce maximum concentrations of milk protein....

Palavras-chave: quitina; quitosana; deriva��o; Amino�cidos essenciais

 

Introducci�n

En los �ltimos a�os, los pol�meros naturales han recibido una mayor atenci�n como alternativa a los pol�meros sint�ticos, con el fin de combinar la fabricaci�n de productos manufacturados, con la protecci�n del medio ambiente, la reducci�n de los costos de materiales y el reciclado de residuos (Israel Barros, 2015).El aumento de la producci�n de camar�n de cultivo ha dado lugar a una mayor cantidad de residuos, lo que conlleva a nuevos problemas ambientales (AL-SAGHEER, AL-SUGHAYER, MUSLIM, & ELSABEE, 2009). Seg�n (Colina, 2014) manifiesta que debido al crecimiento que han tenido estos productos de mar, se busca reducir el impacto ambiental que ocasionan los residuos org�nicos provenientes de la inadecuada disposici�n de los desperdicios del procesamiento pesquero, los cuales son vertidos al mar sin tratamiento previo. Estos residuos s�lidos de origen marino tienen un gran potencial de aplicaci�n en las diferentes industrias; como por ejemplo en la industria farmac�utica y de alimentos, entre otras (Israel Barros, 2015).Seg�n (Israel Barros, 2015) la carne del camar�n es separada de los caparazones, y los desechos de este procesamiento se componen principalmente del cefalot�rax, caparaz�n y en conjunto representan entre el 50% y 70% de todo el camar�n. (CAH�, y otros, 2012). Surge la propuesta de la estandarizaci�n del proceso de extracci�n de quitosano como una alternativa de soluci�n a lo anteriormente mencionado. Ecuador actualmente realiza un cultivo de camar�n que ha consolidado como el primer sector acu�cola organizado, con una fuerte vocaci�n para la comercializaci�n de sus distintos productos hacia los mercados internacionales y nacionales. La producci�n de camar�n en este �ltimo a�o present� una disminuci�n debido a la enfermedad de muerte temprana. Los protocolos para el proceso de extracci�n de quitina y quitosano a partir de caparaz�n de crust�ceos, constan de al menos cuatro etapas que incluyen la preparaci�n de las muestras, desproteinizaci�n, desmineralizaci�n, y desacetilaci�n, usando reactivos qu�micos a diferentes concentraciones, temperaturas y tiempos de reacci�n. Se debe de tener en cuenta que el contenido de quitina, prote�nas, minerales y carotenoides presentes en las c�scaras de camar�n dependen de factores como la especie, la parte del organismo que se escoger� para trabajar, el estado de nutrici�n y el ciclo reproductivo. Al respecto, (MEYER & BLIGH, 1981. ) (Ayala, 2014) realizan el estudio de los rendimientos de quitina y quitosano realizando variaciones en concentraciones de reactivos y tiempos de reacci�n para identificar el mejor tratamiento posible; ya que estos factores son fundamentales para la calidad del producto. Mediante las diferentes investigaciones se tiene que la quitina es un polisac�rido presente ampliamente en la naturaleza y como segundo biopol�mero m�s abundante despu�s de la celulosa. La c�scara de camar�n tiene un alto contenido de quitina (14 a 35 %), del cual se obtiene quitosano. El quitosano es un polisac�rido con muchos usos en la industria de la agricultura, biomedicina, alimentos, en tratamientos de agua residuales y potabilizaci�n, en cosm�tico, entre otros. Esto debido a que posee grupos aminos libres que le infieren mejores propiedades qu�micas y f�sicas (RUIZ, y otros, 2013.)De igual forma, (JIANG, CHEN, & ZHONG, 2003)demostr� el efecto del quitosano en el proceso de clarificaci�n de aguas contaminadas con residuos hidrocarbur�feros, demostrando as� la capacidad del quitosano como agente biocoagulante bajo condiciones de altos niveles de contaminaci�n. (Volkers, 2003)determin� que varias de las propiedades de la quitina y sus derivados (quitosano) est�n estrechamente relacionados con su grado de N- acetilaci�n. Este es el par�metro fundamental que influye en las propiedades y comportamientos de los pol�meros. La pureza del polisac�rido puede ser cuantificada por su grado de N-acetilaci�n, es decir, a mayor grado de acetilaci�n mayor ser� la pureza del quitosano. El principal objetivo de la presente investigaci�n consiste en estandarizar el proceso de obtenci�n de quitosano a partir de las mezclas de exoesqueleto de camar�n por medio de la desmineralizaci�n, desproteinizaci�n, desacetilizaci�n y determinaci�n del grado de N-acetilaci�n a partir de titulaci�n potenciom�trica de las muestras de quitosano.

�

Metodolog�a

La investigaci�n se realiz� en el Laboratorio de Bromatolog�a de la Facultad de Ciencias Pecuarias, ESPOCH, localizada en la ciudad de Riobamba, provincia de Chimborazo, a una altura de 2750 msnm con una temperatura promedio de 12 �C. En el presente Laboratorio se cuenta con el equipo Cromat�grafo de gases de marca Perkin Elmer clarus 580, el mismo que nos permite realizar el an�lisis aminoacidico por derivatizaci�n y poder evaluar la calidad proteica del T0 frente a T1.

Obtenci�n y caracterizaci�n del quitosano

La extracci�n del Quitosano fue realizada siguiendo el protocolo establecido por (Diana Marcela Escobar Sierra, 2013).

 

Tabla 1: Metodolog�a para la obtenci�n de la quitina y quitosano.

Fuente. (Diana Marcela Escobar Sierra, 2013)

�Preparaci�n de la materia prima.�

Se realiz� la obtenci�n de la cascara de camar�n, recolectados en industrias procesadoras de productos marinos y en restaurantes. Cada c�scara se lav� con agua potable para retirar la materia org�nica adherida, se sec� en una estufa a 40�C por 2 horas y finalmente se tritur� y tamiz� hasta obtener tama�os de part�cula entre 0,8 mm y 1,5 mm.

Desproteinizaci�n y desmineralizaci�n.�

Para la desproteinizaci�n se us� una soluci�n de hidr�xido de sodio (NaOH) al 3,5%, en una relaci�n de s�lido: l�quido 1:10 a 50 �C bajo agitaci�n constante por 2 horas; y para la desmineralizaci�n se us� una soluci�n de �cido clorh�drico (HCl) 2N en una proporci�n s�lido: l�quido 1:5 por 90 minutos a temperatura ambiente. La quitina obtenida en esta etapa fue lavada y secada en estufa por 2 horas a 50 �C (K. Heller, 1959).�

Desacetilaci�n de la quitina obtenida con el fin de hidrolizar los grupos amino presentes y obtener as� el quitosano. (h. F. Mark, 1985)

Para ello se utiliz� una soluci�n de hidr�xido de sodio (NaOH) al 50%, en una relaci�n s�lido: l�quido 1:10 a una temperatura de 100 �C con agitaci�n constante por 1 hora. Finalmente, la muestra del biopol�mero obtenida se lav� con agua destilada, se filtr� y se sec� en una estufa por 60 minutos a 50 �C. (A.O.A.C., 1984. )

Aplicaci�n de quitosano en el balanceado

Para poder realizar la investigaci�n se decidi� comprar una marca comercial de balanceado para ganado bovino lechero el cual ser� usado en dos tratamientos, el primero que no tendr� absolutamente nada de quitosano (T0) y el segundo que es el balanceado comercial m�s quitosano (T1). (Brugnerotto, (2001)

El primer balanceado sin cambio alguno se sabe que no utilizan aditivos en su formulaci�n solo materias primas de alta inclusi�n.

El segundo tratamiento esta dado por el mismo balanceado comercial, pero a�adiendo quitosano (T1) el cual est� dado al 1.5 % en relaci�n al alimento. (Fern�ndez, 2007)

Por lo cual el T1 como muestra posee 3g de quitosano en 200g de balanceado ya que si se suministra una cantidad superior de aditivo podr�a alterar los niveles de prote�na del concentrado y no ser digerible para el animal, puesto que en la dieta del balanceado para ganado bovino lechero se debe tomar en cuenta los siguientes est�ndares:

 

Tabla 1: Tabla de cantidades m�nimas de nutrientes en balanceados.

 

Determinaci�n del an�lisis proximal

La caracterizaci�n nutricional se realiz� a trav�s de la empresa AVIPAZ quien dispuso el equipo NIRS � DA 7250 de marca PERTEN, el mismo que usa un sensor con una excelente relaci�n se�al/ruido y sensibilidad; adem�s utiliza un detector indio-galio y Arsenio con un Rango de longitud de onda: 950-1650 nm.� El equipo recoge m�s de 20 espectros por segundo, mientras la muestra gira, trabaja utilizando NETPLUS un software basado en la WEB. El equipo Infrarrojo cercano (NIRS) el mismo que trabaja con curvas de calibraci�n para generar datos exactos y precisos (PhD. Astrid Rivera Rivera, 2017), mediante espectroscopia IR-cercano, analiz� los alimentos considerados T0 y T1 con el fin que la empresa desarrolle balanceados bovinos en la fase de crecimiento se ve la iniciativa mediante� el uso de subproductos como es el caso de la cascara de camar�n, con el fin de tener costos bajos en las materias primas que se usan en producci�n. (Alomar, 1997)

Determinaci�n de amino�cidos�

�Las muestras fueron analizadas utilizando kits fisiol�gicos EZ: faast para GC-FID (Phenomenex, Torrance, CA, EE. UU.); los presentes kits permitieron dar una preparaci�n a la muestra para su posterior an�lisis. Cada una de las muestras tanto el tratamiento cero como el tratamiento 1 fueron analizados directamente; todos los pasos, incluida la limpieza de muestras, la derivaci�n y el an�lisis se realizaron como se describe la tabla del manual del equipo; no se realiz� ninguna preparaci�n de muestra adicional antes de EZ: An�lisis de faast. Todos los an�lisis se realizaron en el Equipo de Marca PERKIN ELMER CLARUS 580 con un detector de ionizaci�n de llama (FID) e inyecci�n manual (1 μL) usando una jeringa SGE de 1 μL (SGE Europe Ltd., Reino Unido: http: //www.uk@sge .com). Se trabaja con una columna GC capilar Zebron ZB-AAA de 10 mx 0,25 mm. El programa de temperatura del horno de la columna es de 32 �C por minuto de 110 a 320 �C. La temperatura del detector FID fue de 320 �C y se inyect� 1 μL a una temperatura de inyecci�n de 250 �C y un nivel dividido de 1:2. El gas portador H2 a una presi�n de 7 psi (un caudal de 1 ml / min). Ser� necesario ajustar el caudal, el ajuste de presi�n y las relaciones divididas, seg�n las especificaciones del instrumento de GC mediante la utilizaci�n de un software denominado CHOMERA el mismo que permite visualizar las condiciones necesarias para empezar el trabajo de an�lisis; las condiciones de an�lisis del est�ndar se basaron en la descripci�n del manual del Kit, el trabajo experimental se realiza en el Laboratorio de Bromatolog�a de la Facultad de Ciencias Pecuarias.

�La determinaci�n de amino�cidos parte de la preparaci�n del medio de eluci�n con reactivos que se encuentran en la bandeja de reactivos dentro del kit que adem�s contiene una rejilla para viales, una rejilla para pipetas y una secci�n para puntas y viales absorbentes. Para acelerar la preparaci�n de la muestra, se recomienda organizar la estaci�n de trabajo.

Preparaci�n del medio de eluci�n

El volumen del medio de eluci�n preparado depende del n�mero de muestras que se analizar�n durante el d�a (200 ul / muestra) por lo cual se debe realizar minutos antes de ejecutar el an�lisis. La combinaci�n del medio de eluci�n consiste en colocar tres partes de reactivo 3a (Hidr�xido de Sodio 0.33N) con 2 partes de reactivo 3b (n-propanol 80%; 3- picolina 20%).

Preparaci�n de muestras por spe y derivatizaci�n

Pipetear 100 ul de muestra problema y 100 uL de reactivo 1 (Norvalina 0.2mM; propanol 10%; �cido clorh�drico 20mM) en cada vial que se utilizara para la preparaci�n de la muestra, conectar una punta absorbente a una jeringa de 1.5 ml y aflojar el pist�n para sumergir la punta dejando que la soluci�n pase a trav�s de la punta absorbente, halar lentamente del pist�n de la jeringa, en peque�os pasos. Posterior a ello pipetear 200 uL de reactivo 2 (n-propanol 30%) en el mismo vial y pasar la soluci�n LENTAMENTE a trav�s de la punta del absorbente dentro del cilindro de la jeringa. Drenar el l�quido del lecho absorbente tirando aire a trav�s de la punta; colocar 200 ul del medio de eluci�n en el vial que se encuentra la muestra y halar el pist�n de la jeringa de 0,6 ml hasta la mitad del cilindro, humedecer la punta absorvente con el medio de eluci�n y observar como sube el l�quido a trav�s de las part�culas absorbentes para luego expulsar las part�culas l�quidas y absorbentes de la punta dentro del vial de preparaci�n de muestra.�

Con la ayuda de un microdispensador (dialamatico drummond) transferir 50 ul de reactivo 4 (cloroformo 60%; cloroformiato de propilo 20%; Isooctano 20%), al vial de preparaci�n de muestra y emulsionar el l�quido en el vial agit�ndolo repetidamente aproximadamente de 5-8 segundos. El paso de emulsificaci�n es efectivo cuando el contenido del vial se vuelve lechoso. permita que las reacciones contin�en 1 minuto o m�s. La emulsi�n se separar� gradualmente en dos capas, se transfiere con el microdispensador 100 ul de reactivo 5 y mezclar aproximadamente 5 segundos y finalmente se pipetea 100ul de reactivo 6 (�cido clorh�drico 1N), observando la separaci�n de la capa org�nica que contiene derivados de amino�cidos misma que va a ser pipeteada y transferida a un vial para proceder a la inyecci�n manual en el equipo obteniendo los diferentes espectros de absorci�n.

 

Resultados y an�lisis

Seg�n (Castro & Kebreau, 2011) indica que un alimento destinado para alimentaci�n animal lo define el cliente (empresas de producci�n y explotaci�n ganadera, fincas u otros) de acuerdo con los objetivos trazados por el productor, ya siendo producci�n animal de leche o de carne u otro rubro de producci�n. Para ello, (Amerling, 1998) clasific� de acuerdo a fuente de nutrientes y energ�a que proporciona el alimento. Alimentos fibrosos: Son aquellos alimentos con menos del 20% de prote�na cruda (PC) y m�s de 20% de fibra cruda (FC) mientras, los alimentos proteicos contienen m�s de 20% de PC y menos de 20% de FC, pero, los energ�ticos contienen menos de 20% de PC y menos de 20% de FC.

�Caracterizaci�n de los biopol�meros obtenidos

La caracterizaci�n nutricional obtenida mediante an�lisis proximal permite evaluar par�metros de calidad Grafico N�1.���

�

Gr�fico 1:� Valoraci�n nutricional de los tratamientos.

Fuente: Autores

En el Gr�fico 1 los resultados de la evaluaci�n nutricional de los tratamientos: T0 y T1 fueron evaluados por metodolog�a IR-cercano, evidentemente se ve un incremento dentro de los par�metros de an�lisis proximal, la diferencia en porcentaje de los componentes nutricionales entre los tratamientos difiere entre el 0,04% - 0,32%.

 

Cuantificaci�n de amino�cidos esenciales

Gr�fico 2: Composici�n de amino�cidos esenciales

Fuente: Autores

 

En el Gr�fico 2, se evidencia un incremento significativo en los tratamientos, siendo el amino�cido esencial con mayor incremento la Histidina el porcentaje de incremento es de 3,32; la presencia de los amino�cidos esenciales atribuye el contenido nutricional del alimento para consumo animal. Los Gr�ficos N�3. y N�4, evidencia el registro gr�fico obtenido en un medio absorbente, que muestra la separaci�n de sustancias mediante una cromatograf�a de gases. El

m�todo utiliz� ciertos est�ndares, componentes qu�micos que permitieron obtener patrones visibles, picos que reflejan la separaci�n f�sica de los componentes de una mezcla.

 

Gr�fico 3:� Cromatograma de amino�cidos por derivatizacion en t0.

Fuente: Laboratorio de Bromatolog�a-Nutrici�n Animal � F.C.P- ESPOCH

Gr�fico 4: Cromatograma de amino�cidos por derivatizacion en t1.

Fuente: Laboratorio de Bromatolog�a-Nutrici�n Animal � F.C.P- ESPOCH

 

Discusi�n de resultados y conclusiones

Los espectros obtenidos representan cada uno de los amino�cidos con su correspondiente tiempo de retenci�n al cu�l estos fueron detectados, el cromatograma presenta amino�cidos esenciales y no esenciales con sus derivados, la importancia de la presente Investigaci�n radica en el incremento de los principales amino�cidos esenciales como metionina, fenilalanina, lisina� e histidina; de tal manera que los microorganismos del rumen en los bovinos requieren de prote�nas degradables, los animales requieren de amino�cidos para su nutrici�n. Seg�n (GANADERO, 2018)se�alan que los rumiantes requieren cantidades esenciales para su �ptimo crecimiento y lactaci�n. La investigaci�n de estudio permiti� evidenciar el incremento en porcentaje de algunos amino�cidos esenciales como: Metionina 0,45%; Fenilalanina 0,43%; Lisina 2,6%; Histamina 3,32%, todos los amino�cidos esenciales detectados estar�an participando en diversos procesos como la s�ntesis de prote�nas de los tejidos y la leche, o la s�ntesis de otros metabolitos corporales. La mayor�a de amino�cidos sirven como precursores para la gluconeog�nesis y todos pueden ser convertidos a �cidos grasos.

�Por lo tanto, se puede utilizar el quitosano como aditivo dentro de la formulaci�n del alimento balanceado ya que puede optimizar la funci�n ruminal y rendimiento de la prote�na microbiana.

Sin embargo, la dosificaci�n con cantidades adecuadas del aditivo ayudara alcanzar los niveles deseados de nitr�geno ureico en la leche; la dosificaci�n debe ser adecuada para comprobar su efecto nutricional, en virtud de que el incremento de la dosis lo convertir�a en un alimento toxico para el animal siendo anti nutricional al efecto deseado.

�Adem�s, el incremento de los amino�cidos metionina y de lisina ayudara a producir concentraciones m�ximas de prote�na en la leche; tomando en consideraci�n seg�n menciona (Anavitarte, 1970) advierte que la suplementaci�n con amino�cidos dentro de la dieta debe tener un manejo cuidadoso, pues est� en juego la producci�n y reproducci�n de cada animal, que requieren dietas diferenciales.

 

Referencias

1.                 Alomar, D. &. (1997). Fundamentos De La Espectroscopia De Reflectancia En El Infrarojo Cercano (Nirs) Como M�todo De An�lisis De Forrajes. Obtenido de http://mingaonline.uach.cl/scielo.php?pid=S0304-88021998000100011&script=sci_arttext

2.                 Al-Sagheer, F., Al-Sughayer, M., Muslim, S., & Elsabee, M. (2009). Extraction and characterization of chitin and chitosan from marine sources in the Persian Gulf. En Carbohydr. Polymers. (p�gs. 77:410-419.).

3.                 Amerling, C. (1998). Tecnolog�a de la carne (Manejo de los subproductos). EUNED. S/P, C. 98-103 p.

4.                 Anavitarte, F. (1970). Manual de Anatom�a Comparada de los Animales Dom�sticos. INSTITUTO NACIONAL TECNOL�GICO DIRECCI�N GENERAL DE FORMACI�N PROFESIONAL.

5.                 Ayala, A. C. (2014). Evaluaci�n de la actividad antif�ngica del Quitosano contra el hongo Mycophorella Fijensis Morelet que produce la Sigatoka Negra que ataca el pl�tano. . Revista Iberoamericana de Pol�meros y Materiales. , 15, 312-338.

6.                 Brugnerotto, J. L. ((2001). En Polymer (p�gs. 42, 3569-3580.).

7.                 Cah�, T., Santos, S., Mendes, A., C�rdula, C., Chavante, S., L.B., C. J., . . . Bezerra, R. (2012). Recovery Of Protein, Chitin, Carotenoids And glycosaminoglycans from Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) processing waste. En Process Biochem. (p�gs. 47:570-577).

8.                 Castro, F. D., & Kebreau, R. J. ( 2011). An�lisis comparativo nutricional y econ�mico de tres alimentos balanceados para vacas lecheras de alta producci�n. Zamorano, Honduras, 37.

9.                 Colina, M. A. (2014). Evaluaci�n de los procesos para la obtenci�n qu�mica de quitina y Quitosano a partir de los desechos de cangrejos. Revista Iberoamericana de Pol�meros y Materiales, , 15(1), 21-43.

10.             Diana Marcela Escobar Sierra, C. P. (2013). Optimizaci�n de un protocolo de extracci�n de quitina y quitosano desde caparazones de crust�ceos. Scientia et technica, 7.

11.             Exibal, B. (2005). Balanceado Extra Lechero. Riobamba, Ecuador.

12.             Fern�ndez, E. N. (2007). Optimal routine conditions for the determination of the degree of acetylation of chitosan. En Carbohydrate Polymers (p�gs. 61, 155-161.).

13.             Ganadero, c. (10 de julio de 2018). �C�mo funcionan los amino�cidos en la suplementaci�n de los rumiantes? Obtenido de CONTEXTO GANADERO :

https://www.contextoganadero.com/ganaderia-sostenible/como-funcionan-losaminoacidos-en-la-suplementacion-de-los-rumiantes

14.             H. F. Mark, N. M. ( 1985). En Encyclopedia of Polymer Science and Engineering. Vol. 1. (Wiley, Nueva York).

15.             Israel Barros, L. G. (2015). Extraction And Quantitative Comparison Of Chitin Obtained From The Shellof Callinectes sapidus AND Penaeus vannamei. Revista U.D.C.A Actualidad & Divulgaci�n Cient�fica.

16.             Jiang, X., Chen, L., & Zhong, W. (2003). A new linear potentiometric titration method for the determination of deacetylation degree of chitosan. . Carbohydr. Polymers, 54:457-463.

17.             Jos� Alejandro Molina Zerpa, M. C. (2014). Efecto del uso de quitosano en el mejoramiento del cultivo del arroz (Oryza sativa L. variedad sd20a). Revista Iberoamericana de Pol�meros y Materiales, , 15(1), 21-43.

18.             K. Heller, L. C. (1959). Naturforsch, 14, 476.

19.             Meyer, s., & Bligh, d. C. (1981. ). Agric. Food Chem.

20.             Rivera, A (2017). REVISI�N: NIRS EN EL AN�LISIS DE ALIMENTOS PARA LA NUTRICI�N ANIMAL . 5, 1-13.

21.             Ruiz, A., Cardelle-Cobas, A., Garc�a-Bermejo, A., Montilla, A., Olano, A., & Corzo, N. (2013.). Synthesis, characterization and functional properties of galactosylated derivatives of chitosan through amide formation. Food Hydrocoll. , 33:245-255.

22.             Volkers, K. C. (2003). Prediction of the quality of forage maize by near-infrared reflectance spectroscopy. Animal Feed Science and Technology, 109(1�4), 183�194.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

�2020 por los autores. Este art�culo es de acceso abierto y distribuido seg�n los t�rminos y condiciones de la licencia Creative Commons Atribuci�n-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0) (https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/).