����������������������������������������������������������������������������������

 

 

Cultivos alternativos a partir de producci�n de biomasa y fenoles del hongo Pleurotus Ostreatus, con base en materias primas de bajo costo y residuos agroindustriales

 

Alternative crops from the production of biomass and phenols from the Pleurotus Ostreatus mushroom, based on low-cost raw materials and agro-industrial waste

 

Culturas alternativas a partir da produ��o de biomassa e fen�is do cogumelo Pleurotus Ostreatus, a partir de mat�rias-primas de baixo custo e res�duos agroindustriais

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Correspondencia: anita423@gmail.com

 

Ciencias T�cnicas y Aplicadas

Art�culo de Investigaci�n

 

 

* Recibido: 02 de mayo de 2025 *Aceptado: 25 de junio de 2025 * Publicado: �08 de julio de 2025

 

        I.            Investigadora Independiente. Profesional egresada de la Universidad de las Am�ricas (UDLA) y Universidad Internacional de la Rioja (UNIR). Magister en Gesti�n Ambiental y Energ�tica en las Organizaciones. Ingenier�a en Biotecnolog�a, Ecuador.

 

 

Resumen

Pleurotus ostreatus es un hongo lign�cola sapr�fito conocido como hongo ostra, posee una gran adaptabilidad y versatilidad para tolerar temperaturas hasta los 32 �C. Su cultivo por lo general se realiza en medios s�lidos, sin embargo, el cultivo en medio l�quido ha demostrado tener grandes ventajas mejorando su desarrollo. Por lo mencionado, se presenta una investigaci�n que tuvo como objetivo general optimizar un medio de cultivo alternativo con base en residuos agroindustriales y materias primas de bajo costo para la producci�n de biomasa y fenoles a partir del hongo Pleurotus ostreatus. Se aplicaron m�todos de cultivo, anal�ticos y estad�sticos para evidenciar los par�metros adecuados que permitan tener un incremento en la producci�n de biomasa y fenoles en medios sumergidos por un periodo de tiempo de fermentaci�n de 10 d�as. Los resultados demostraron durante el tiempo de validaci�n del medio de cultivo sumergido el cual ten�a todos los nutrientes, pH, concentraciones de carbono y nitr�geno adecuadas para el crecimiento del hongo de las variedades Gris y Rosa, mostrando que existe una diferencia significativa cuando se utiliza como fuente de sustrato al salvado de trigo. En la variedad Gris el valor p fue de 2.2 𝑥10−6 para la biomasa, para los fenoles se obtuvo un valor de p de 3.571 𝑥10−7. Para la variedad Rosa se obtuvo el valor de p de 2.2 𝑥10−6 para la biomasa y para los fenoles el valor de p fue de 3.617 𝑥10−6 en el an�lisis ANOVA. Adem�s, se demostr� que el incremento del pH genera una disminuci�n en el crecimiento de la biomasa de las dos variedades analizadas en este estudio, ya que se evidencia un crecimiento de biomasa a partir del 4to d�a culminando el 8vo d�a y manteniendo rangos de crecimiento bajos. Se concluye, con base en los resultados obtenidos que, el suministro de salvado de trigo como fuente de carbono influye de manera positiva en la producci�n de metabolitos secundarios como lo son los fenoles, adem�s, por su 4 composici�n natural este act�a como fuente de nitr�geno, sin embargo, el utilizar fuentes de nitr�geno alternativas demuestran que existe un incremento en el crecimiento de micelio de las variedades Gris y Rosa para la obtenci�n de metabolitos de inter�s.

Palabras clave: Hongo ostra; Pleurotus ostreatus; Alimentaci�n; Biomasa; Fenoles; Cultivo Liquido; Agroindustrial.

 

Abstract

Pleurotus ostreatus is a saprophytic lignicolous fungus known as oyster mushroom. It is highly adaptable and versatile, tolerating temperatures up to 32�C. Its cultivation is usually carried out in solid media; however, cultivation in liquid media has shown significant advantages, improving its development. Therefore, a study is presented with the general objective of optimizing an alternative culture medium based on agro-industrial waste and low-cost raw materials for the production of biomass and phenols from the Pleurotus ostreatus fungus. Cultivation, analytical, and statistical methods were applied to determine the appropriate parameters for increasing biomass and phenol production in submerged media for a 10-day fermentation period. The results demonstrated that during the validation time of the submerged culture medium, it had all the nutrients, pH, carbon and nitrogen concentrations suitable for the growth of the fungus of the Gray and Pink varieties, showing that there is a significant difference when wheat bran is used as a substrate source. In the Gray variety, the p-value was 2.2 𝑥10−6 for biomass, for phenols a p-value of 3.571 𝑥10−7 was obtained. For the Pink variety, a p-value of 2.2 𝑥10−6 was obtained for biomass and for phenols the p-value was 3.617 𝑥10−6 in the ANOVA analysis. Furthermore, it was shown that increasing pH leads to a decrease in biomass growth in the two varieties analyzed in this study, with biomass growth evident starting on the 4th day and culminating on the 8th day, maintaining low growth rates. Based on the results obtained, it is concluded that the use of wheat bran as a carbon source positively influences the production of secondary metabolites such as phenols. Furthermore, due to its natural composition, it acts as a nitrogen source. However, the use of alternative nitrogen sources shows an increase in mycelial growth of the Gray and Pink varieties for obtaining metabolites of interest.

Keywords: Oyster mushroom; Pleurotus ostreatus; Food; Biomass; Phenols; Liquid Culture; Agroindustry.

 

Resumo

O Pleurotus ostreatus � um fungo lign�cola sapr�fita conhecido como cogumelo-ostra. � altamente adapt�vel e vers�til, tolerando temperaturas at� 32�C. O seu cultivo � geralmente realizado em meios s�lidos; no entanto, o cultivo em meios l�quidos tem demonstrado vantagens significativas, melhorando o seu desenvolvimento. Assim sendo, � apresentado um estudo com o objetivo geral de otimizar um meio de cultura alternativo baseado em res�duos agroindustriais e mat�rias-primas de baixo custo para a produ��o de biomassa e fen�is do fungo Pleurotus ostreatus. Foram aplicados m�todos de cultivo, anal�ticos e estat�sticos para determinar os par�metros apropriados para aumentar a produ��o de biomassa e fen�is em meios submersos durante um per�odo de fermenta��o de 10 dias. Os resultados demonstraram que durante o tempo de valida��o do meio de cultura submerso, este apresentou todos os nutrientes, pH, concentra��es de carbono e azoto adequados para o crescimento do fungo das variedades Cinza e Rosa, mostrando que existe uma diferen�a significativa quando se utiliza o farelo de trigo como fonte de substrato. Na variedade Cinza, o valor de p foi de 2,2 𝑥10−6 para a biomassa, para os fen�is obteve-se um valor de p de 3,571 𝑥10−7. Para a variedade Rosa, foi obtido um valor de p de 2,2 𝑥10−6 para a biomassa e para os fen�is o valor de p foi de 3,617 𝑥10−6 na an�lise ANOVA. Al�m disso, foi demonstrado que o aumento do pH leva a uma diminui��o do crescimento da biomassa nas duas variedades analisadas neste estudo, com um crescimento da biomassa evidente a partir do 4� dia e culminando no 8� dia, mantendo baixas taxas de crescimento. Com base nos resultados obtidos, conclui-se que a utiliza��o do farelo de trigo como fonte de carbono influencia positivamente a produ��o de metabolitos secund�rios, como os fen�is. Al�m disso, devido � sua composi��o natural, atua como fonte de azoto. No entanto, a utiliza��o de fontes alternativas de azoto demonstra um aumento do crescimento micelial das variedades Cinza e Rosa para a obten��o de metabolitos de interesse.

Palavras-chave: Cogumelo-ostra; Pleurotus ostreatus; Alimentos; Biomassa; Fen�is; Cultura L�quida; Agroind�stria.

 

Introducci�n

A nivel mundial la desnutrici�n persiste como una crisis humanitaria, afectando a cientos de millones de personas en todo el mundo y obstaculizando el progreso hacia el desarrollo sostenible, las �ltimas cifras revelan una realidad alarmante que exige una acci�n coordinada y urgente. Seg�n el informe El estado de la seguridad alimentaria y la nutrici�n en el mundo 2024 de la Organizaci�n de las Naciones Unidas para la Alimentaci�n y la Agricultura (FAO), el Fondo Internacional de Desarrollo Agr�cola (FIDA), el Fondo de las Naciones Unidas para la Infancia (UNICEF), el Programa Mundial de Alimentos (PMA) y la Organizaci�n Mundial de la Salud (OMS), se estima que alrededor de 735 millones de personas padecieron hambre en el a�o 2022. Esta cifra representa un retroceso significativo en los esfuerzos por erradicar el hambre, exacerbado por los impactos de la pandemia de COVID-19, los conflictos, el cambio clim�tico y las crisis econ�micas (FAO et al., 2024).  

En este orden de ideas, la desnutrici�n adopta m�ltiples formas, incluyendo la subalimentaci�n, la deficiencia de micronutrientes, el sobrepeso y la obesidad. La desnutrici�n infantil sigue siendo una preocupaci�n cr�tica, la UNICEF, en su informe El estado mundial de la infancia 2023, se�ala que aproximadamente 148 millones de ni�os menores de cinco a�os sufrieron de retraso en el crecimiento (demasiado bajos para su edad), 45 millones padecieron emaciaci�n (demasiado delgados para su altura) y 37 millones ten�an sobrepeso en el a�o 2022, estas condiciones tienen consecuencias a largo plazo en el desarrollo f�sico y cognitivo, perpetuando ciclos de pobreza y desigualdad (UNICEF, 2023).

Asimismo, la comunidad internacional reconoce la urgencia de alcanzar el Objetivo de Desarrollo Sostenible 2 (ODS): Hambre Cero para 2030. Sin embargo, las tendencias actuales sugieren que se necesitan esfuerzos mucho m�s ambiciosos y coordinados para revertir el aumento del hambre y la desnutrici�n, invertir en sistemas alimentarios sostenibles, fortalecer la agricultura local, mejorar el acceso a una nutrici�n adecuada y abordar las causas profundas de la pobreza y la desigualdad son pasos esenciales para lograr que se disminuyan los niveles de desnutrici�n, Organizaci�n de las Naciones Unidas (ONU 2018).

Bajo este contexto, se han realizado estudios que confirman los avances del uso del hongo Pleurotus ostreatus, com�nmente conocido como hongo ostra, que ha demostrado un gran potencial en el desarrollo de cultivos alternativos sostenibles. Su capacidad para crecer en una amplia variedad de residuos agroindustriales de bajo costo y producir biomasa rica en nutrientes y compuestos fen�licos valiosos lo convierte en un recurso prometedor. Tiene la capacidad de degradar lignina, fenoles y polifenoles en un 60% de su contenido original por lo que es una de las especies m�s utilizadas en el campo de la investigaci�n (Kumar, 2020).

A su vez, tiende a desarrollarse de acuerdo en una relaci�n entre Carbono/Nitr�geno que se le suministre por lo que va a depender de la administraci�n de vitaminas, minerales requeridos para un mejor crecimiento. La biomasa del hongo Pleurotus ostreatus es una fuente rica de prote�nas de alta calidad, fibra diet�tica, vitaminas como la riboflavina, niacina y folatos, y minerales como el potasio, hierro y selenio (Akter et al., 2022). Esta composici�n nutricional lo convierte en un alimento valioso para el consumo humano, especialmente en regiones donde la seguridad alimentaria es un desaf�o, puesto que es apto para el consumo humano, animal y un excelente biofertilizante, tambi�n es una fuente natural de compuestos fen�licos, antioxidantes que tienen diversos beneficios para la salud, en alimentos funcionales, cosm�ticos y productos farmac�uticos (Contreras et al., 2022).

Una de las ventajas clave de su cultivo, es su capacidad para crecer en una amplia variedad de residuos agroindustriales, que son subproductos de bajo costo de diversos procesos agr�colas e industriales. Esto no solo reduce los costos de producci�n, sino que tambi�n ayuda a resolver el problema de la gesti�n de residuos, entre ellos; paja de cereales como el trigo, arroz, cebada, aserr�n y virutas de madera, bagazo de ca�a de az�car, hojas y tallos de ma�z, c�scaras de caf�, pulpa de remolacha, entre otros.

Este contexto permite afirmar que se requieren m�s investigaciones para optimizar los procesos de cultivo y extracci�n, y para explorar todo el potencial de Pleurotus ostreatus como un cultivo alternativo prometedor. Una de las principales motivaciones de la investigaci�n que se presenta, la cual tiene prop�sito aportar hallazgos innovadores respecto al cultivo que puedan servir para promover alternativas sustentables con el aprovechamiento de este recurso.

Importancia del problema

Las cifras por desnutrici�n y hambre en el mundo son alarmantes, se le adiciona tambi�n la denominada deficiencia de micronutrientes, siendo un fen�meno insidioso, tambi�n llamado hambre oculta, el cual, contin�a afectando a una porci�n significativa de la poblaci�n mundial, estim�ndose en m�s de dos mil millones de individuos (FAO, 2024).

La OMS (2023) ha enfatizado que estas deficiencias pueden comprometer la funci�n inmunol�gica, incrementando la vulnerabilidad a enfermedades infecciosas y obstaculizando el desarrollo cerebral �ptimo, especialmente en ni�os, la carencia de vitaminas y minerales esenciales como el hierro, el yodo, el zinc y la vitamina A, conlleva graves implicaciones para la salud humana, el desarrollo cognitivo y f�sico, y la productividad econ�mica (Black et al., 2021). Existe una compleja interacci�n entre las deficiencias de m�ltiples micronutrientes y el aumento del riesgo de enfermedades no transmisibles en etapas posteriores de la vida.

En la mayor�a de los casos, los organismos internacionales han intensificado sus esfuerzos para abordar esta crisis multifac�tica a trav�s de intervenciones coordinadas. El Programa Mundial de Alimentos (PMA) desempe�a un papel crucial al proporcionar asistencia alimentaria vital en situaciones de emergencia humanitaria y al implementar programas a largo plazo destinados a fortalecer la resiliencia de las comunidades vulnerables frente a la inseguridad alimentaria.

Por otro lado, iniciativas innovadoras en biotecnolog�a y fortificaci�n de alimentos est�n emergiendo como herramientas prometedoras para mejorar el contenido nutricional de los alimentos b�sicos y aumentar el acceso a micronutrientes esenciales en poblaciones vulnerables (Bouis y Saltzman, 2017), que sigue siendo relevante por su impacto, pero se complementa con investigaciones m�s recientes en implementaci�n.

Una de ellas es la exhaustiva investigaci�n de las propiedades del hongo Pleurotus ostreatus, el cual ofrece una soluci�n sostenible y econ�micamente viable para la producci�n de alimentos, la generaci�n de productos de valor a�adido y la gesti�n de residuos. Se ha comprobado que, la biomasa de este hongo es un recurso valioso para la alimentaci�n humana y animal, mientras que sus compuestos fen�licos tienen diversas aplicaciones en las industrias alimentaria, cosm�tica y farmac�utica.

Com�nmente, su estudio se ha realizado en medios s�lidos de cultivo, pero seg�n investigaciones recientes como la propuesta por Nieto y Chegwin (2010) se ha evidenciado que, en medios l�quidos y sumergidos genera una ventaja importante, debido a que, los nutrientes se encuentran en constante agitaci�n generando un mejor crecimiento de la biomasa y de metabolitos de inter�s y aplicaci�n en el campo de la ciencia, entre estos se destacan los fenoles, glucanos, lacasas y lignina peroxidasas.

Los fenoles son compuestos org�nicos arom�ticos que tienen como grupo funcional un hidroxilo, se encuentran presentes en concentraciones m�nimas por la fermentaci�n natural que poseen los hongos y bacterias como es el caso de Pleurotus ostreatus. Su clasificaci�n est� divida en fenoles simples, �cidos fen�licos donde se encuentra el �cido benzoico, �cido cin�mico y el �cido g�lico, siendo este uno de los m�s importantes para la determinaci�n de fenoles en hongos y polifenoles que abarcan a los taninos�(Kumar, 2020).

En los hongos, los metabolitos secundarios m�s encontrados son los polifenoles los cuales posen acciones como: agentes reductores, antioxidantes que protegen a las c�lulas contra el da�o oxidativo y limitantes en el riesgo de enfermedades degenerativas. Esta especie de hongos por medio de procesos metab�licos es capaz de generar metabolitos de inter�s comercial. Pero como se evidencia en estudios, su desarrollo se lo ha realizado en medios de cultivo s�lidos puesto que se necesita su cuerpo fruct�fero que es el producto m�s apreciado en el mercado. Al realizar cultivos en medio l�quido la investigaci�n es escasa, ya que no existen suficientes estudios que revelen las condiciones adecuadas del medio de cultivo para el desarrollo de Pleurotus ostreatus y su posterior comercializaci�n obteniendo metabolitos de inter�s (Ferrer-Romero et al., 2019).

Esta especie ha demostrado tener una gran adaptabilidad y versatilidad por su capacidad de tolerar temperaturas altas que oscilan entre los 23 y 32�C presentando un mejor desarrollo a una temperatura de 28�C, en donde ha sido capaz de resistir a plagas y enfermedades que se encuentran en la naturaleza (Tesfay et al., 2020). Adem�s, para obtener un desarrollo adecuado del hongo Pleurotus ostreatus se debe mantener un control de pH en un rango de 4.5 a 7, siendo el �ptimo de 5.5 y una humedad de sustrato entre 60 y 70%.

Lo estudios realizados utilizando sustratos y componentes de bajo costo para la producci�n de biomasa y fenoles en esta especie de hongos se lo ha realizado en medios de cultivo como PDA y MEA, brindando un desarrollo dentro de los par�metros normales en los cuales crece el hongo. Sin embargo, el realizar un proceso de escalado genera una elevaci�n de costos de producci�n y de tiempo para obtener metabolitos secundarios, por lo que se han investigado opciones a partir de residuos agroindustriales como el salvado de trigo y harina de trigo que poseen un alta cantidad de nitr�geno y carbono de forma natural, permitiendo un crecimiento vigoroso, pero no se tienen datos concretos que suministr�ndole estos residuos agroindustriales el hongo sea capaz de producir suficientes metabolitos secundarios y que su crecimiento se de en un medio de cultivo sumergido (Nieto y Chegwin, 2010).

Es por esto, que la evaluaci�n de estos metabolitos secundarios como lo son los fenoles es de gran importancia por sus propiedades antioxidantes, en las cuales se encuentran: impedir que los metales catalicen sus reacciones de oxidaci�n aun cuando son susceptibles a ser oxidados y actuar como agentes quelantes (Mel�ndez et al., 2015).

Adem�s, plantear una metodolog�a adecuada para la obtenci�n de fenoles va a permitir que exista una producci�n de biomasa f�ngica en condiciones controladas, optimizando par�metros cin�ticos y reduciendo la probabilidad de contaminaci�n. As� como una mejor producci�n de metabolitos secundarios como lo son los fenoles (Ferrer et al., 2016).

Adicionalmente, el hacer uso del salvado de trigo como sustrato influye en un desarrollo del hongo de manera positiva, puesto que, este sustrato tiene concentraciones altas de almid�n como fuente de energ�a �til, adem�s de vitaminas y minerales lo cual ayuda a tener un mejor desarrollo del hongo Pleurotus ostreatus (Ar�valo, 2016).

 

Materiales y m�todos

Se propuso como objetivo general Optimizar un medio de cultivo alternativo con base en residuos agroindustriales y materias primas de bajo costo para producci�n de biomasa y fenoles a partir del hongo Pleurotus Ostreatus.

In�culo

Las cepas de las tres variedades del hongo Pleurotus ostreatus obtenidas por la Universidad de las Am�ricas, fueron inoculadas en cajas Petri con medio Potato Dextrose Agar (PDA) para la variedad gris y blanca y en medio de Malt Extract Agar (MEA) para la variedad rosa. Cada una de las cepas fueron incubadas a una temperatura de 25�C durante 10 d�as en un ambiente oscuro (Petre, 2015).

Pre in�culo medio l�quido

Se realizaron raspados del micelio de Pleurotus ostreatus con la ayuda de un aza de Drigalsky de las variedades Gris y Blanca en harina de trigo integral, mientras que para la variedad Rosa se realizaron raspados en salvado de trigo.

Cultivo en medio l�quido

Se realiz� la formulaci�n del medio de cultivo en el cual se emplearon harina de trigo integral y salvado de trigo como fuente principal de carbono, ambos en concentraciones de 40 g/L. Adem�s, se utiliz� como fuente de nitr�geno extracto de levadura 2g/L y KNO3 4g/L. Asimismo, se emplearon diferentes sales como: KH2PO4 0.8 g/L, MgSO4 0.5 g/L y Na2HPO4 0.2 g/L. Para realizar este cultivo se prepararon 200 mL de volumen de medio de cultivo para realizar este paso.

Determinaci�n de biomasa

Para la curva de calibrado de las variedades del hongo Pleurotus ostreatus se hicieron diluciones seriadas de 10 mL. A continuaci�n, se determin� la biomasa a 600 nm en el espectrofot�metro. Para la determinaci�n del peso seco se prepararon 33 capuchones de aluminio por cada variedad y se los dej� en la estufa por un lapso de 24 h. Las diluciones realizadas previamente se centrifugaron a 10.000 rpm por 10 min y se realizaron 3 lavados con agua est�ril.

Curva de calibrado de �cido g�lico

Para la determinaci�n de fenoles se utiliz� la curva de calibrado de �cido g�lico . Esta curva se realiz� preparando una disoluci�n de �cido g�lico de 0.1 g/L y se hizo una diluci�n 1:10, conjuntamente se prepar� una disoluci�n de carbonato de sodio al 20%. Despu�s de obtener estas disoluciones se diluy� 1:2 el reactivo Folin-Ciocalteu, en tubos de ensayo cubiertos con papel aluminio se realizaron diluciones de 20 �L, 30 �L, 40 �L, 60 �L y 80 �L respectivamente, inmediatamente se agreg� 250 �L del reactivo Folin-Ciocalteu y se lo agit�, se agreg� 750 �L de la disoluci�n realizada previamente hasta aforar a 2 mL con agua destilada y se lo dej� reposar en oscuridad por 2 horas. Para realizar el blanco se adicionaron 250 �L del reactivo Folin-Ciocalteu y 750 �L de carbonato de sodio al 20% y la absorbancia se ley� a 760 nm.� Cada ensayo se realiz� por triplicado donde se obtuvo una desviaci�n est�ndar de cada experimento y un promedio de fenoles presentes por tratamiento en mg/L.

Cuantificaci�n de fenoles

Para la determinaci�n de fenoles se utiliz� el m�todo colorim�trico planteado por Singlenton y Rossi (Marina et al., 2008). En un tubo c�nico de 15 mL se adicionaron 100 μl del medio donde fueron cultivadas las variedades del hongo Pleurotus ostreatus Blanca, Gris y Rosa, 1600 μl de agua destilada y 200 μl del reactivo Folin-Ciocalteu. A cada uno de los tubos se les realiz� agitaci�n por v�rtex y se los dej� en reposo durante 8 minutos. Como siguiente paso, se adicionaron 100 μl de carbonato de sodio al 20% y se lo dejo en oscuridad por dos horas. Culminado el tiempo se ley� la absorbancia a 760 nm en el espectrofot�metro. Esta metodolog�a se repite para la validaci�n del contenido de fenoles en el medio de cultivo optimizado de las variedades del hongo Pleurotus ostreatus gris y rosa por un periodo de 10 d�as.

Selecci�n de variables para la producci�n de fenoles

Para realizar un an�lisis de la fuente de carbono, nitr�geno y pH para una mayor producci�n de fenoles se analiz� a cada variedad de hongo bajo 4 tratamientos distintos y con concentraciones de nutrientes investigadas en bibliograf�a. Cada uno de estos resultados fue realizado por triplicado, se realiz� una fermentaci�n de 10 d�as en oscuridad, 25 �C y a 150 rpm. Por �ltimo, para determinar la concentraci�n de fenoles totales en las muestras se utiliz� la curva acido g�lico realizada previamente.

En primer lugar para la variedad Gris en el tratamiento 1 se utiliz� 30 g/L de harina de trigo como fuente C, 4 g/L de KNO3 como fuente de N y un pH de 5.7; en el tratamiento 2 se utiliz� 30 g/L de harina de trigo como fuente C, 2 g/L de extracto de levadura como fuente de N y un pH de 5.7; en el tratamiento 3 se utiliz� 30 g/L de salvado de trigo como fuente C, 4 g/L de KNO3 como fuente de N y un pH de 6.5 y en el tratamiento 4 se utiliz� 30 g/L de salvado de trigo como fuente C, 2 g/L de extracto de levadura como fuente de N y un pH de 6.5.

Para la variedad Rosa en el tratamiento 1 se utiliz� 30 g/L de harina de trigo como fuente C, 4 g/L de KNO3 como fuente de N y un pH de 5.7; en el tratamiento 2 se utiliz� 30 g/L de harina de trigo como fuente C, 2 g/L de extracto de levadura como fuente de N y un pH de 5.7; en el tratamiento 3 se utiliz� 30 g/L de salvado de trigo como fuente C, 4 g/L de KNO3 como fuente de N y un pH de 6.5 y en el tratamiento 4 se utiliz� 30g/L de salvado de trigo como fuente C, 2 g/L de extracto de levadura como fuente de N y un pH de 6.5.

Y por �ltimo, para la variedad Blanca el tratamiento 1 tuvo concentraciones de 30 g/L de harina de trigo como fuente C, 4 g/L de KNO3 como fuente de N y un pH de 5.7; en el tratamiento 2 se utiliz� 30 g/L de harina de trigo como fuente C, 2 g/L de extracto de levadura como fuente de N y un pH de 5.7; en el tratamiento 3 se utiliz� 30 g/L de salvado de trigo como fuente C, 4 g/L de KNO3 como fuente de N y un pH de 6.5 y en el tratamiento 4 se utiliz� 30 g/L de salvado de trigo como fuente C, 2 g/L de extracto de levadura como fuente de N y un pH de 6.5.

Dise�o central compuesto optimizaci�n 1

Al haber analizado el contenido de fenoles en las variedades del hongo Pleurotus ostreatus se realiz� un dise�o central compuesto aleatorio de la variedad Gris y Rosa, puesto que presentaron mayor contenido de fenoles.

Para esto, se realizaron 18 experimentos por variedad a diferentes concentraciones de carbono, nitr�geno y variaciones de pH. Los valores de cada una de las concentraciones de la fuente de carbono, nitr�geno y pH se determinaron en base a literatura. Se utiliz� el programa Statistica (Mariano, 2015) para realizar la tabla con cada una de las variables y sus respectivas concentraciones (Tabla 1)

Los valores de los axiales se determinaron en base al programa estad�stico Statistica y se calcularon mediante la siguiente f�rmula:

 

Tabla 1 Dise�o central compuesto variedad Gris y Rosa

 

An�lisis estad�stico

Para determinar si existen diferencias significativas en cada medio de cultivo para la producci�n de fenoles y biomasa se realiz� un an�lisis ANOVA en el programa RStudio con cada una de las variedades del hongo Pleurotus ostreatus.

Dise�o central compuesto optimizaci�n final

Una vez obtenido los resultados donde se decidi� ampliar los rangos de estudio para la optimizaci�n del medio de cultivo sumergido del hongo Pleurotus ostreatus, se realiz� un segundo dise�o central compuesto aleatorio de las variedades Gris y Rosa. Para esto, se realizaron 18 experimentos por cada variedad utilizando diferentes concentraciones de carbono, nitr�geno y pH. Las concentraciones de cada una de las variables que fueron analizadas se determinaron en base a los resultados preliminares obtenidos durante la primera optimizaci�n. Se utiliz� el programa Statistica (Mariano, 2015) para realizar la Tabla 2 con cada una de las variables y sus respectivas concentraciones.

Los valores de los axiales se determinaron en base a la siguiente f�rmula:

 

Tabla 2 Dise�o central compuesto variedad Gris y Rosa

 

Condiciones de cultivo en medio sumergido

Se colocaron 1500 mL de medio de cultivo est�ril en un matraz de 2000 mL. Estos medios fueron inoculados con el 20% del prein�culo optimizado (v/v). Se incubaron los matraces de las variedades Gris y Rosa durante 10 d�as en oscuridad a 150 rpm y 25 �C.

Crecimiento de la biomasa en el medio de cultivo optimizado

El crecimiento de la biomasa se llev� a cabo bas�ndose en la metodolog�a de la determinaci�n de masa del micelio por la t�cnica de gravimetr�a dada por (Ferrer et al., 2019).

 

Resultados y discusi�n

Determinaci�n de biomasa

Se colocaron las muestras con la biomasa recuperada en los capuchones y se los dej� en la estufa durante 48 horas a 75 �C hasta obtener un peso constante. Por �ltimo, los valores del peso seco obtenido se relacionaron con la absorbancia de cada muestra. En la Tabla 2 se muestran los valores obtenidos en la curva de calibraci�n de biomasa de las variedades Gris, Rosa.

 

Tabla 3 Resultados curva de calibrado variedad gris y rosa

 

Curva de calibrado de �cido G�lico

Cada ensayo se realiz� por triplicado donde se obtuvo una desviaci�n est�ndar de cada experimento y un promedio de fenoles presentes por tratamiento en mg/L.

 

Tabla 4 Concentraciones para realizar curva de calibrado de �cido G�lico

 

 

Crecimiento de la biomasa en el medio de cultivo optimizado

El crecimiento de la biomasa se lleva a cabo bas�ndose en la metodolog�a de la determinaci�n de masa del micelio por la t�cnica de gravimetr�a dada por (Ferrer et al., 2019).

Para determinar el crecimiento de la biomasa, se tomaron puntos cada 24 horas durante 10 d�as. Para cada al�cuota se obtuvo 1 mL el cual fue medido en el espectrofot�metro a 600 nm y se calcul� la concentraci�n tomando en cuenta la curva de calibrado realizada previamente.

 

Gr�fico 1 Curva de calibrado variedad Gris y Rosa

Nota: (A) Curva de calibrado variedad gris. (B) Curva de calibrado variedad rosa

 

Para poder determinar la biomasa de las variedades Gris y Rosa del hongo Pleurotus ostreatus se obtuvieron las curvas de calibrado que se muestran en el Grafico 1 (A y B). Para la variedad Gris se obtuvo un valor de , donde se demuestra que existe una buena concentraci�n en base a las diluciones realizadas, a pesar de que el punto 4 presenta una ligera variaci�n en la linealidad de la curva.

Seg�n el estudio realizado por Rodr�guez et al. (2019), se manifiesta que existen cambios durante la construcci�n de la curva de calibrado por errores al momento de realizar las muestras, o existen errores experimentales que afectan y alteran la dispersi�n de los datos. Sin embargo, esto no va a ser un factor que impacte al momento de contrastar la producci�n de biomasa en el crecimiento de Pleurotus ostreatus, ya que, adem�s, se demuestra que tomando en cuenta la totalidad de la concentraci�n de la biomasa esta se ajuste a una regresi�n lineal y se ve reflejada en los valores que se demuestran en la curva de calibrado de biomasa (Rodr�guez et al., 2019).

Por otro lado, la variedad Rosa present� un valor de , obteniendo menos linealidad en diversos puntos que la variedad Gris. Con base en, el estudio realizado por Tip�n (2016) se puede demostrar que el comportamiento observado de la biomasa producida con las diluciones realizadas tiende a variar por el tiempo de fermentaci�n y el pH utilizado en el medio. Ya que, se recomienda tener un pH m�ximo de 5.5 para que la producci�n de biomasa se evidencie mejor, a su vez es importante ensayar tiempo de fermentaci�n entre 6 y 12 d�as para que la concentraci�n de biomasa sea m�s fiable. A pesar, de las dispersiones obtenidas, la curva de calibrado para esta variedad se encuentra dentro de los rangos con valores mayores a , lo cual indica que se trabaj� utilizando la metodolog�a adecuada para la obtenci�n de biomasa en el hongo (Tipan,2016).

Determinaci�n de Fenoles

Para la determinaci�n de fenoles se realiz� una curva de calibrado de �cido g�lico en donde se obtuvo valor de R² de 0.9977, este dato da una linealidad buena la cual permite calcular la cantidad de fenoles de manera precisa en las muestras que a ser analizadas. El punto de la recta que presenta una mayor desviaci�n es el quinto de con un valor de 0.0429.

 

Gr�fico 2 Curva de calibrado de �cido G�lico

 

El valor obtenido en la curva de calibrado para fenoles totales se contrast� con la curva de fenoles realizada por Vera (2021) donde se obtuvo un valor R² de 0.9975, el obtenido en este estudio es de R² de 0.9977 lo cual demuestra que las diluciones realizadas para la obtenci�n de la curva de calibrado son fiables, obteniendo as� concentraciones viables para la determinaci�n de fenoles en el hongo Pleurotus ostreatus (Vera, 2021).

Selecci�n de variables

En la Tabla 5 se observa que los resultados de la variedad Gris, evidencia que existe una mayor concentraci�n de fenoles en el tratamiento 3 con un valor de 39.26 mg/L y la menor concentraci�n de fenoles obtenida en esta variedad es del tratamiento 1 con un valor de 6.1 mg/L.

 

Tabla 5 Concentraci�n de fenoles variedad Gris

RESULTADOS VARIEDAD GRIS
	R1 (nm)	R2 (nm)	R3 (nm)	Promedio (nm)	Concentraci�n de Fenoles (mg/L)	Disp.
1	0.213	0.282	0.178	0.2243	6.1	0.052918
2	1.25	1.177	1.26	1.2291	36.18	0.045138
3	1.239	1.470	1.286	1.3319	39.26	0.12248
4	0.282	0.178	0.273	0.2443	6.7	0.057622

 

En la Tabla 7 se observan los resultados obtenidos de la variedad Blanca, en donde el mejor tratamiento fue el 2 obteniendo una concentraci�n de fenoles de 24.4 mg/L y el tratamiento con la menor producci�n de fenoles fue el 3 teniendo una concentraci�n de 5.9 mg/L.

 

Tabla 7 Concentraci�n de fenoles variedad Blanca

RESULTADOS VARIEDAD BLANCA
	R1 (nm)	R2 (nm)	R3 (nm)	Promedio (nm)	Concentraci�n de Fenoles (mg/L)	Disp.
1	0.312	0.365	0.359	0.3453	9.72	0.029023
2	0.847	0.862	0.802	0.837	24.44	0.031225
3	0.191	0.189	0.273	0.2177	5.9	0.047931
4	0.213	0.178	0.282	0.2243	6.1	0.052918

 

En la Tabla 8 se puede observar los resultados de la variedad Rosa, la cual evidencia que existe una mayor concentraci�n de fenoles en el tratamiento 4 con un valor de 32.58 mg/ y la menor concentraci�n de fenoles obtenida en esta variedad es del tratamiento 1 con un valor de 10.72 mg/L.

 

 

 

Tabla 8 Concentraci�n de fenoles variedad Rosa

RESULTADOS VARIEDAD ROSA
	R1 (nm)	R2 (nm)	R3 (nm)	Promedio (nm)	Concentraci�n de Fenoles (mg/L)	Disp.
1	0.379	0.364	0.393	0.3787	10.72	0.014503
2	0.799	0.745	0.755	0.7663	22.32	0.028729
3	0.917	0.983	0.898	0.9327	27.3	0.044613
4	1.174	0.937	1.216	1.109	32.58	0.150429

 

Los resultados evidencias que, el contenido de fenoles totales resultantes de los primeros experimentos se los puede comparar con los resultados obtenidos por Ayşenur (2016) el cual us� un medio de cultivo s�lido a base de desechos de cultivo de papas, man� y aserr�n de nogal con naranjo para el crecimiento del hongo Pleurotus ostreatus. En este estudio se tom� 1 kg de cada residuo las cuales fueron procesadas previamente. Para la determinaci�n de fenoles se utiliz� el m�todo Folin-Ciocalteu donde se obtuvo que el mejor medio de cultivo fue el que conten�a como sustrato al aserr�n de nogal con naranjo debido a las composiciones que tiene este sustrato, por lo que se obtuvo una concentraci�n de 2.672 +/- 0.03 mg de �cido g�lico por gramo de medio de cultivo (Ayşenur et al., 2016).

Compar�ndolo con los resultados obtenidos en este estudio, utilizando un medio sumergido con salvado de trigo y harina de trigo, se demostr� que existe una mayor producci�n de metabolitos secundarios cuando los medios tienen altos contenidos de fibra ya que la menor concentraci�n de fenoles fue de 5.9 mg/L en la variedad Blanca y la mayor fue de 39.26 mg/L de la variedad Gris. Esto se puede deber a que en un medio liquido los nutrientes tienen mayor biodisponibilidad lo que hace que se genere una mayor cantidad de metabolitos de inter�s. Esto se debe a que en un medio l�quido los nutrientes tienen mayor biodisponibilidad lo que hace que se genere una mayor cantidad de metabolitos de inter�s.

Por otro lado, al contrastar los resultados obtenidos con el estudio realizado por Ferrer (2016) el cual uso un medio l�quido de YPG se obtuvo una m�xima producci�n de fenoles de 98.88 mg/L que a comparaci�n de los 39.26 mg/L de fenoles obtenidos en la variedad Gris en este proyecto es menor, aunque cabe recalcar que esta cantidad fue obtenida a los 7 d�as y 12 horas de la inoculaci�n del hongo en medio� YPG , mientras que el resultado que se obtuvo en medio de cultivo con salvado de trigo se analiz� a los 10 d�as de fermentaci�n (Ferrer et al., 2019).

Los resultados obtenidos se pueden dar por las composiciones que tiene el salvado de trigo que son la celulosa (9.9/100 g), hemicelulosa (33/100 g) y lignina (9/100 g) mientras que el YPG solo posee glucosa (28.4 g/L). Por lo que, el uso de un medio de cultivo con varias fuentes de carbono hace que el hongo no acepte de mejor manera el nutriente a comparaci�n de un medio cl�sico como el YPG que solo tiene glucosa como fuente de carbono (Chaquilla et al., 2018).

Optimizaci�n dise�o central compuesto

Compuesto de fenoles variedad Gris Pleurotus ostreatus

A partir de la obtenci�n de fenoles se utiliz� un dise�o central compuesto para la optimizaci�n del medio, determinando las concentraciones adecuadas a las que debe estar el medio de cultivo. En la Tabla 9, se observan los valores codificados y decodificados de las variables a analizar que son: fuente de carbono, fuente de nitr�geno y pH para conocer la influencia en la determinaci�n de fenoles y biomasa de la variedad Gris y Rosa de Pleurotus ostreatus.

 

Tabla 9 Dise�o central compuesto determinaci�n de fenoles y biomasa variedad Gris y Rosa Pleurotus ostreatus

Nota: De la concentraci�n de la fuente de carbono, nitr�geno y pH para la producci�n de biomasa y fenoles en la variedad Gris y Rosa de Pleurotus ostreatus

 

Con base en los resultados obtenidos se realizaron los gr�ficos de superficie de respuesta de la variedad Gris (Ver Gr�fico 3 - A, B, C), y de la variedad Rosa (Ver Gr�fico 4 - A, B, C), donde se decide ampliar los rangos de estudio durante la optimizaci�n.

 

Gr�fico 3 Superficie de respuesta de la concentraci�n de fenoles y biomasa variedad Gris Pleurotus ostreatus

Nota: (1) Respuesta de concentraci�n de fenoles; A) Salvado de trigo en funci�n del Nitr�geno (KNO3), B) Salvado de trigo en funci�n del pH, C) Nitr�geno (KNO3) en funci�n del pH. (2) Respuesta de concentraci�n de biomasa; A) Salvado de trigo en funci�n del Nitr�geno (KNO3), B) Salvado de trigo en funci�n del pH, C) Nitr�geno (KNO3) en funci�n del pH.

Para la determinaci�n de la producci�n de biomasa como se evidencia en el Gr�fico 3, la zona de color rojo oscuro de las variables analizadas indica que existe una producci�n alta de biomasa mientras que las zonas marcadas en verde y amarillo presentan una producci�n m�nima. En la variedad gris los resultados fueron: una concentraci�n de 38 g/L para el salvado de trigo como fuente de carbono, 6 g/L de KNO3 como fuente de nitr�geno y un pH de 9. Esto se determin� con las gr�ficas de superficie y con la Tabla 9 que muestra los valores cr�ticos para esta variedad.

En el Grafico 3 (1 � ABC) se analiza la producci�n de fenoles de la variedad Gris, donde se observ� que la mayor producci�n de estos se da en concentraciones de salvado de trigo de 30-50 g/L, un pH de 6-7 y con 2-4 g/L de KNO3. Estudios realizados por Ferrer (2019) demuestran que para la producci�n de metabolitos secundarios de inter�s es importante mantener concentraciones de fuente de carbono altas, puesto que la producci�n de metabolitos aumentar�, tomando en cuenta el tiempo de fermentaci�n y la fuente de nitr�geno suministrada ya que con base en los resultaos obtenidos se puede evidenciar que la fuente de nitr�geno en concentraciones bajas y altas aportar� de manera positiva para la producci�n de fenoles (Ferrer et al., 2019).

Adem�s, Serna et al. (2006) demuestra la influencia del pH en la producci�n de metabolitos secundarios es un factor importante, esto se debe a que en un rango de 3-7 se va a obtener un mejor desarrollo de metabolitos de inter�s, lo cual indica que se debe ampliar los rangos de estudio para una mayor obtenci�n de fenoles en esta variedad (Serna et al., 2006). Por otro lado, para la producci�n de biomasa en la variedad Gris el dise�o central compuesto indica que existe una mayor producci�n en concentraciones de 30-50 g/L de salvado de trigo, un pH de 7.5 y 2-4 g/L de KNO3 como se observa en el Grafico 3 (2 � ABC).

En estudios como los de Melaunori et al. (2022) se determina la concentraci�n de biomasa en diferentes cepas del hongo Pleurotus ostreatus, el cual evidencia que existe una mayor producci�n utilizando como fuente de sustrato al salvado de trigo, incluso demuestra que este sustrato genera mayor producci�n en un periodo de tiempo corto, por lo que es posible reducir el tiempo de fermentaci�n para la obtenci�n de biomasa en esta especie (Melanouri et al., 2022). Sin embargo, del pH se deben mantener en concentraciones bajas con un m�ximo de 6.5 ya que no solo la fuente de carbono es necesaria para la obtenci�n de biomasa sino, debe existir una relaci�n de C/N y pH para generar una mayor producci�n de biomasa.

 

 

Compuesto de fenoles variedad Rosa Pleurotus ostreatus

De la misma manera, se realiz� un dise�o central compuesto para la variedad rosa, para determinar las concentraciones �ptimas a las que se debe encontrar el medio de cultivo. Como se evidencia en la Tabla 9, se observan los valores codificados y decodificados de las variables a analizar que son: fuente de carbono, fuente de nitr�geno y pH para conocer la influencia en la determinaci�n de fenoles y biomasa de la variedad Rosa de Pleurotus ostreatus. Con base en los resultados obtenidos se realizaron gr�ficas de superficie de respuesta, donde se decide ampliar los rangos de estudio durante la optimizaci�n.

 

Gr�fico 4 Superficie de respuesta de la concentraci�n de fenoles y biomasa variedad Rosa Pleurotus ostreatus

Nota: (1) Respuesta de concentraci�n de fenoles; A) Salvado de trigo en funci�n del Nitr�geno (KNO3), B) Salvado de trigo en funci�n del pH, C) Nitr�geno (KNO3) en funci�n del pH. (2) Respuesta de concentraci�n de biomasa: A) salvado de trigo en funci�n del Nitr�geno (extracto de levadura). B) salvado de trigo en funci�n del pH. C)� Nitr�geno (extracto de levadura) en funci�n del pH.

 

Para la producci�n de biomasa se muestra que la zona de color rojo oscuro de las variables analizadas indica que existe una producci�n alta de biomasa mientras que las zonas marcadas en verde y amarillo presentan una producci�n m�nima de biomasa. En la variedad Rosa los resultados fueron: pH con un valor cr�tico de 6.47; salvado de trigo en una concentraci�n de 30.63 g/L y extracto de levadura en 2.07 g/L como se evidencia en la Tabla 9. Para tener una mejor producci�n de biomasa en esta variedad se decide ampliar los rangos de estudio.

Tabla 10 Valores cr�ticos variedad Rosa Pleurotus ostreatus

 

En el Gr�fico 4 (1-ABC) que corresponde a la variedad Rosa los rangos de concentraciones que producen mayor cantidad de fenoles son 25-50 g/L de salvado de trigo, un pH 5.4-6.4 y 3.5-4 g/L de extracto de levadura. Tomando en cuenta estudios previos se demuestra que la producci�n de metabolitos secundarios por hongos saprof�ticos tiene una relaci�n de producci�n cuando adquiere el suministro de nutrientes, sales, fuentes de carbono altas en carbohidratos; adem�s, se debe tomar en cuenta factores como el pH, tiempo de incubaci�n y temperatura ya que si estos se alteran y no son los adecuados la producci�n de fenoles se va a ver reducida generando p�rdidas en la producci�n de metabolitos de inter�s (Huang, 2010).

Por otro lado, para esta variedad como se observa en el Gr�fico 4 (2-ABC) la mayor cantidad de biomasa se da en concentraciones de 50 g/L de salvado de trigo, pH de 7.5 y una concentraci�n de extracto de levadura de 4.5 g/L. Guill�n et al. (2014) determin� que al incrementar la concentraci�n de la fuente de carbono se aumenta la producci�n de biomasa, pero esto genera que exista un bajo rendimiento en relaci�n a la biomasa y fuente carbono, demostrando que se necesita un constante suministro de la fuente de carbono seleccionada (Guill�n et al., 2014). Con base en los resultados obtenidos se opt� por realizar un segundo proceso de optimizaci�n para la biomasa y fenoles teniendo en cuenta que los fenoles al ser un metabolito secundario no est�n relacionados con el desarrollo del organismo.��

Optimizaci�n 2 dise�o central compuesto

Dise�o central compuesto de fenoles y biomasa variedad Gris

Mediante la aplicaci�n de un dise�o central compuesto, se obtuvieron gr�ficas de superficie de respuesta para conocer la relaci�n entre las variables de fuente de carbono, fuente de nitr�geno y pH para determinar la influencia de estas en la producci�n de fenoles y biomasa. Por medio de estas gr�ficas se determin� la m�xima producci�n de fenoles y biomasa y las concentraciones que deben tener cada una de las variables como se observa en el Grafico 5.

La zona de color rojo oscuro de las variables analizadas indica que existe una producci�n alta de fenoles Gr�fico 5 (1 - ABC), mientras que las zonas marcadas en verde y amarillo presentan una producci�n m�nima de este metabolito secundario. En la variedad Gris los resultados fueron: una concentraci�n de 35 g/L para el salvado de trigo como fuente de carbono, 6 g/L de KNO3 como fuente de nitr�geno y un pH de 8. Adem�s, se muestra la Tabla 11 del dise�o central compuesto para esta variedad con un total de 18 experimentos.

 

Tabla 11 Dise�o central compuesto determinaci�n de fenoles y biomasa variedad Gris y Rosa Pleurotus ostreatus

Nota: De la concentraci�n de la fuente de carbono, nitr�geno y pH para la producci�n de biomasa y fenoles en la variedad Gris y Rosa de Pleurotus ostreatus

 

 

 

Gr�fico 5 Superficie de respuesta de la concentraci�n de fenoles y biomasa variedad Gris Pleurotus ostreatus

Nota: (1) Respuesta de concentraci�n de fenoles; A) Salvado de trigo en funci�n del Nitr�geno (KNO3), B) Salvado de trigo en funci�n del pH, C) Nitr�geno (KNO3) en funci�n del pH. (2) Respuesta de concentraci�n de biomasa: A) salvado de trigo en funci�n del Nitr�geno (extracto de levadura). B) salvado de trigo en funci�n del pH. C)� Nitr�geno (extracto de levadura) en funci�n del pH.

 

La zona de color rojo oscuro de las variables analizadas indica que existe una producci�n alta de biomasa Grafico 5 (2 � ABC) mientras que las zonas marcadas en verde y amarillo presentan una producci�n m�nima de biomasa. En la variedad Gris los resultados fueron: una concentraci�n de 35 g/L para el salvado de trigo como fuente de carbono, 6 g/L de KNO3 como fuente de nitr�geno y un pH de 8.

Con base en los resultados obtenidos se puede asegurar que se necesita una mayor concentraci�n de salvado de trigo y de KNO3 como fuente de nitr�geno para que exista una mayor producci�n de fenoles. A su vez en la producci�n de biomasa se puede observar que se necesitan concentraciones altas de carbono y nitr�geno para una mejor producci�n, adem�s de un pH en rangos superiores a 9. Ferrer et al. (2019) evidencia que el tiempo de cultivo en una de las variables que influye en la producci�n de fenoles puesto que en la determinaci�n de fenoles dada por Leucopaxillus gigantenus en fermentaci�n sumergida obtuvo un mejor comportamiento a los 15 y 60 d�as manteniendo concentraciones altas de carbono y nitr�geno para la obtenci�n de este metabolito secundario (Ferrer et al., 2019).

En el caso de la biomasa se puede inferir que la concentraci�n se debe mantener en 40-50 g/L de la fuente de carbono para no tener un valor dependiente en el efecto de la relaci�n C/N, sin embargo, en concentraciones bajas de la fuente de carbono para la producci�n de biomasa la relaci�n entre C/N puede llegar a ser significativa lo cual determina que exista una baja producci�n de biomasa (Ferrer et al., 2019).

Dise�o central compuesto de fenoles y biomasa variedad Rosa

De la misma forma, se realiz� un dise�o central compuesto para la variedad osa donde se obtuvieron gr�ficas de superficie de respuesta para estudiar la relaci�n entre las variables de pH, fuente de carbono, fuente de nitr�geno y su influencia en la producci�n de fenoles y biomasa. El Grafico 6 de superficie de respuesta muestran las concentraciones adecuadas para la obtenci�n de fenoles como metabolito secundario del hongo Pleurotus ostreatus y la producci�n de biomasa del mismo.

La zona que se encuentra en color rojo oscuro de las variables analizadas indica que existe una producci�n m�xima de fenoles, mientras que, las zonas en color amarillo y verde presentan una producci�n baja de fenoles. En base a esto, se obtienen los resultados de optimizaci�n para la variedad rosa que son: 35g/L de salvado de trigo como fuente de carbono, 8 g/L de extracto de levadura como fuente de nitr�geno y un pH de 7. Adem�s, se muestra la Tabla 11 del dise�o central compuesto para esta variedad con un total de 18 experimentos.

 

Gr�fico 6 Superficie de respuesta de la concentraci�n de fenoles y biomasa variedad Rosa Pleurotus ostreatus

Nota: (1) Respuesta de concentraci�n de fenoles; A) Salvado de trigo en funci�n del Nitr�geno (extracto de levadura), B) Salvado de trigo en funci�n del pH, C) Nitr�geno (extracto de levadura) en funci�n del pH. (2) Respuesta de concentraci�n de biomasa: A) Salvado de trigo en funci�n del Nitr�geno (extracto de levadura), B) Salvado de trigo en funci�n del pH. C)� Nitr�geno (extracto de levadura) en funci�n del pH

En cuanto a la biomasa se puede observar que se necesitan concentraciones de salvado de trigo altas con un pH en rangos de 5-9 para obtener una mejor producci�n, adem�s de un contenido de extracto de levadura superior a los 6 g/L, por lo que bas�ndose en las gr�ficas se determinaron las concentraciones de las variables analizadas que son: 35 g/L de salvado de trigo como fuente de carbono, 8 g/L de extracto de levadura como fuente de nitr�geno y un pH de 7.

En el caso de la variedad Rosa de Pleurotus ostreatus se puede evidenciar que para que exista una mejor producci�n de compuestos fen�licos se deben mantener concentraciones de salvado de trigo y extracto de levadura como fuente de nitr�geno altas, manteniendo el pH en 7-8. Autores como Petre (2015) mencionan que, la determinaci�n de la fuente de carbono y nitr�geno es muy importantes para la obtenci�n de metabolitos secundarios de inter�s.

Es por esto que el extracto de levadura en varias ocasiones no es la mejor fuente de nitr�geno ya que no suele ser tan efectiva, m�s bien es utilizada como suplemento de minerales y vitaminas para un mejor desarrollo del hongo Pleurotus ostreatus. Sin embargo, en la producci�n de metabolitos como los fenoles se ha demostrado que las concentraciones de extracto de levadura entre 6-8 g/L act�an de manera positiva para obtener una mejor producci�n de fenoles totales (Petre, 2015).

Para la biomasa ocurre algo distinto, puesto que, bas�ndose en las gr�ficas obtenidas la concentraci�n de salvado de trigo se debe mantener en� rangos elevados, pero el extracto de levadura no tiene una diferencia significativa ya que en concentraciones m�nimas o altas se va a ver una producci�n de biomasa, tomando en cuenta que el pH para la producci�n de biomasa se debe encontrar en rangos m�s bajos entre 4.5-6 es por ello que en la gr�fica se muestra una baja producci�n de biomasa a pH alto.

En este caso, coinciden Guill�n et al. (2014), quienes muestran que los hongos de pudrici�n blanca como lo es Pleurotus ostreatus para que exista una producci�n elevada de biomasa el pH �ptimo debe ser 5.5 ya que a pH mayores a 6 el crecimiento se ve afectado (Guill�n et al., 2014). Por otro lado, Confortin et al (2008) observ� que existe un incremento gradual de biomasa cuando el pH logra llegar a 7, tomando en cuenta que esto puede variar en dependencia de la variedad que se est� utilizando del hongo y los metabolitos producidos por el mismo, por lo que se puede incrementar o reducir su crecimiento en pH m�s altos o bajos (Confortin et al., 2008).

Validaci�n del crecimiento de biomasa y fenoles por un periodo de 10 d�as

Durante 10 d�as de fermentaci�n se evalu� el crecimiento de biomasa y fenoles en el medio de cultivo alternativo para la variedad Gris y Rosa descrito en puntos anteriores. Se construyeron curvas de crecimiento tomando una al�cuota de 6mL cada 24 horas por el tiempo establecido. Como se observa en el Gr�fico 7 (1-AB) para la variedad Gris la fase de latencia se mantiene durante 4 d�as para la producci�n de biomasa.

En el caso de los fenoles a partir del tercer d�a existe un incremento en la concentraci�n de este metabolito secundario. La fase exponencial se mantiene durante el d�a 5 al d�a 9 hasta llegar a tener una concentraci�n de 9.049 g/L de biomasa. En los fenoles la fase exponencial se mantiene a partir del d�a 3 al d�a 8 con una concentraci�n final de 41.377 mg/L; por lo que es posible evidenciar un aumento significativo en el crecimiento del hongo Pleurotus ostreatus de esta variedad utilizando las concentraciones adecuadas de salvado de trigo, KNO3 y un pH de 8.

 

Gr�fico 7 Curvas de biomasa y fenoles variedad Gris y Rosa Pleurotus ostreatus

Nota: (1) Variedad Gris; (A) Curva de crecimiento de biomasa, (B) Curva de concentraci�n de fenoles por 10 d�as. (2) Variedad Rosa; (A) Curva de crecimiento de biomasa, (B) Curva de concentraci�n de fenoles por 10 d�as.

 

Para la variedad Rosa, se obtuvieron curvas de crecimiento como se muestran en el Grafico 7 (2 � AB), donde se observ� que la fase de latencia para la producci�n de biomasa se mantiene a su vez hasta el cuarto d�a; para los fenoles en el tercer d�a este empieza a tener un mejor desarrollo. La fase exponencial se mantuvo para la producci�n de biomasa del d�a 4to al 7mo con un valor de 15.55 g/L demostrando que a partir de ese d�a existe un periodo de latencia reduciendo la producci�n de biomasa ya que el d�a 10 es el que presenta una menor concentraci�n de biomasa.

Para los fenoles en esta variedad la producci�n aumenta desde el d�a 3 al d�a 8 con una concentraci�n final de 55.48 mg/L; a su vez es posible evidenciar un aumento significativo en la producci�n de biomasa y fenoles pese a que los metabolitos secundarios son los que se encuentran en mayor concentraci�n durante los 10 d�as de fermentaci�n para la variedad Rosa de Pleurotus ostreatus.

En las curvas de crecimiento de biomasa de las variedades Gris y Rosa, se observ� que por 4 d�as se mantiene la fase de latencia, a partir del quinto d�a empieza la fase exponencial, sin embargo, para las dos variedades se evidencia un descenso en la producci�n de biomasa durante el d�a 9 y 10. Estudios realizados por Vamanu (2012) demuestran que es normal que la fase de latencia se mantenga durante los cuatro primeros d�as, mientras que la fase estacionaria es posible evidenciarla entre el sexto y s�ptimo d�a lo cual manifiesta que para la obtenci�n de metabolitos secundarios de inter�s es �ptimo tener mayores concentraciones en este lapso de tiempo.

Adem�s, Mumpini (2017) demostr� que existen casos en los cuales la fase estacionaria se prolonga hasta el d�a 28 lo cual permite tener mayor concentraci�n de metabolitos secundarios, pero es importante tomar en cuenta los requerimientos, condiciones de cultivo, sustrato y fuente de nitr�geno utilizada para que la producci�n se vea reflejada en un periodo de tiempo m�s largo. Estudios realizados por Bettin (2011) han demostrado que, al cabo de 177 horas, existe un descenso en la concentraci�n celular para la producci�n de biomasa hasta en un 69%.

Esto se debe a que el hongo Pleurotus ostreatus reporta este problema en fermentaci�n sumergida ya que se produce una aut�lisis del micelio. Otro de los factores que pudieron afectar en la producci�n de biomasa durante 10 d�as es que, como se nota el crecimiento var�a con el paso de los d�as y se asocia a que a partir del d�a 5 existen aumentos de viscosidad en el medio de cultivo y esto ocasiona que sea m�s dif�cil obtener una homogeneizaci�n de la muestra (Bettin et al., 2011).

Por otro lado, en la determinaci�n de los fenoles esta no se encuentra asociada de forma directa al crecimiento. Por lo que, se deben favorecer las condiciones para tener un m�ximo rendimiento del producto final. Como se menciona, existe un aumento y descenso de la concentraci�n de fenoles en diferentes d�as. Lo cual se debe a que puede existir una limitaci�n en la fuente de carbono y est� a empezado a disminuir causando estr�s, esto provoca que exista una alteraci�n por d�a en la concentraci�n de metabolitos secundarios obtenida.

Es notable que la concentraci�n fen�lica empieza a aumentar a partir del segundo d�a, teniendo variaciones que van a depender de lo explicado anteriormente (Ferrer et al., 2016). En el an�lisis estad�stico ANOVA, se obtuvo un valor de p de �para la biomasa, para los fenoles se obtuvo un valor de p de �en la variedad Gris. Para la variedad Rosa se obtuvo el valor de p de �para la biomasa y para los fenoles el valor de p fue de �es decir, existen diferencias significativas en el crecimiento de la biomasa de las dos variedades del hongo Pleurotus ostreatus.

A su vez, en la concentraci�n de fenoles por medio de los valores obtenidos por el an�lisis estad�stico se demostr� que tambi�n existen diferencias significativas en la concentraci�n de fenoles determinada durante los 10 d�as de validaci�n del medio de cultivo optimizado. Estos valores se pueden contrastar bas�ndose en el estudio de P�rez y Casta�eda (2016) donde se demuestra que el uso de componentes como la fuente de carbono, nitr�geno y sales para el desarrollo de los hongos es importante ya que el resultando va a ser proporcional a la cantidad de biomasa que se obtenga en el medio durante los d�as requeridos (P�rez y Casta�eda, 2016).

 

Tabla 12 Par�metros cin�ticos obtenido a partir de las concentraciones de biomasa y fenoles

	�m�x. (h-1)	td (h)	rx (g/L*d�a)	rp (mg/L*d�a)	qp (d�a-1)	Yp/x (gp/gx)
Variedad Gris	0.006	107	1.317	4.905	5.27E-04	4.56E-03
Variedad Rosa	0.021	33.20	0.203	4.860	3.70E-04	3.51E-0.3

Nota: medio alternativo a base de salvado de trigo

 

Finalmente, es importante calcular los par�metros cin�ticos a partir de las concentraciones iniciales y finales tanto de biomasa como de fenoles como se observa en la Tabla 10, las cuales fueron determinadas con base en la fase exponencial para obtener una mejor concentraci�n de los par�metros analizados. Al contrastar los par�metros obtenidos en base en los estudios realizados por Salmones et al. (2018) en Pleurotus ostreatus para determinar fenoles se utilizaron componentes como el ftalato (DEHF) el cual ayuda a que la concentraci�n de fenoles aumente, debido a esto se obtuvo un valor de la velocidad m�xima de crecimiento �m�x. de 0.018 y 0.21 () determinando que la biomasa con el suministro de este componente ayuda a tener un mejor desarrollo.

Adem�s, se report� que esta especie despu�s de 96 horas de crecimiento en medio l�quido sin adici�n de xenobi�ticos es capaz de desarrollarse en el mismo (Salmones, 2018). Por otro lado, en estudios como el de Bettin et al, (2011) el valor de la �m�x.� es similar a la obtenida en este estudio donde utilizaron como fuente de carbono el trigo y un tiempo de fermentaci�n de 14 d�as, por lo que se puede asegurar que el tiempo de fermentaci�n es uno de los factores importantes para obtener el valor de �max y ver el desarrollo de la biomasa en un medio de cultivo sumergido (Bettin et al., 2011). Para el tiempo de duplicaci�n se puede observar que en la variedad Rosa es menor a comparaci�n de la Gris lo que evidencia que a la variedad Gris le toma m�s tiempo en multiplicarse tardando 107 horas. Comparando con el estudio de Navarro (2018) el tiempo de duplicaci�n para diferentes cepas de hongos en las que se encuentra tambi�n Pleurotus ostreatus se obtuvo un valor de 5.20 �y para P. djamor un td de 6.26 , esto fue realizado utilizando como fuente de carbono a la glucosa, lo que se demuestra en este estudio es que la glucosa influye a que el tiempo de duplicaci�n sea menor que con el suministro de otras fuentes de carbono.

Con base en lo demostrado en el an�lisis de Gonz�lez, la fuente de carbono puede retardar al tiempo de duplicaci�n de Pleurotus ostreatus (Navarro, 2018). Adicionalmente, God�nez et al. (2009) realiz� estudios de Pleurotus ostreatus utilizando diferentes fuentes de nitr�geno y pH donde evidencia que el qp llega a tener valores mayores cuando el medio de cultivo tiene concentraciones de pH entre 4.5 y 6, debido a que en los hongos de pudrici�n blanca la regulaci�n del pH en el medio inicial ayuda a que el valor de qp sea mayor y que no existan interacciones con otros compuestos que se encuentren en el medio de cultivo.

Sin embargo, es importante aclarar que este estudio fue realizado para determinar lacasas (Zaragoza et al., 2009), en contraste con el estudio de Beltr�n et al (2021) se manifiesta que en varias ocasiones para la determinaci�n de metabolitos secundarios en medios sumergidos con hongos es importante que el pH est� en concentraciones altas para que se pueda obtener mayores concentraciones por lo que el valor de qp puede variar con relaci�n al estudio a realizar (Beltr�n et al., 2021).

 

Conclusiones

La optimizaci�n de un medio de cultivo alternativo en fase sumergida, fundamentado en la valorizaci�n de residuos agroindustriales y materias primas de bajo costo, para la producci�n dual de biomasa f�ngica y compuestos fen�licos a partir del hongo sapr�fito Pleurotus ostreatus, representa un avance significativo hacia una biorrefiner�a m�s sostenible y econ�micamente viable. Los resultados obtenidos en esta investigaci�n no solo corroboran el potencial de este hongo como un eficiente biorreactor, sino que tambi�n iluminan las intrincadas interacciones entre la composici�n del medio, las condiciones de cultivo y la producci�n de metabolitos primarios y secundarios de alto valor a�adido.

La identificaci�n del salvado de trigo como una fuente de carbono particularmente eficaz para la inducci�n de altas concentraciones de fenoles reviste una importancia considerable. Este residuo agroindustrial, abundante y a menudo subutilizado, emerge como un sustrato no solo econ�mico sino tambi�n inductor de v�as metab�licas secundarias en Pleurotus ostreatus conducentes a la s�ntesis de estos compuestos bioactivos. Los fenoles, conocidos por sus potentes propiedades antioxidantes, antiinflamatorias y antimicrobianas, tienen amplias aplicaciones en las industrias alimentaria, farmac�utica y cosm�tica. La capacidad de obtenerlos a partir de un subproducto de la agricultura a�ade una dimensi�n de sostenibilidad y circularidad a su producci�n, aline�ndose con los principios de la econom�a circular y la biotecnolog�a verde.

Asimismo, la selectividad observada en las fuentes de nitr�geno, con el extracto de levadura y el nitrato de potasio (KNO₃) favoreciendo la producci�n de biomasa y fenoles respectivamente en diferentes variedades del hongo, subraya la importancia de la adaptaci�n del medio a las necesidades nutricionales espec�ficas de cada cepa para maximizar la producci�n del metabolito de inter�s. El extracto de levadura, rico en amino�cidos, vitaminas del grupo B y otros factores de crecimiento estimula el metabolismo primario y, por ende, el crecimiento micelial. Por otro lado, la respuesta diferencial al KNO₃ sugiere que la disponibilidad y la forma del nitr�geno pueden influir en las rutas metab�licas secundarias, desviando el flujo de carbono hacia la s�ntesis de fenoles bajo ciertas condiciones.

No obstante, la influencia del pH en la producci�n de biomasa y fenoles revela una relaci�n compleja y a menudo antag�nica, la observaci�n de que un pH m�s bajo favorece el crecimiento micelial, en concordancia con la literatura cient�fica sobre el cultivo de Pleurotus ostreatus, destaca la importancia de mantener condiciones �ptimas para la actividad enzim�tica involucrada en la asimilaci�n de nutrientes y la s�ntesis de componentes celulares. En contraste, la tendencia de un pH m�s alto a incrementar la concentraci�n de metabolitos secundarios como los fenoles sugiere la activaci�n de mecanismos de estr�s o la modulaci�n de enzimas clave en la v�a fenilpropanoide, la principal ruta biosint�tica de estos compuestos. Esta dicotom�a subraya la necesidad de una optimizaci�n precisa del pH, posiblemente mediante estrategias de control din�mico durante la fermentaci�n, para equilibrar la producci�n de biomasa y la acumulaci�n de fenoles.

El an�lisis cin�tico de la producci�n de biomasa y fenoles a lo largo de un periodo de fermentaci�n de 10 d�as proporcion� informaci�n valiosa sobre la din�mica metab�lica de Pleurotus ostreatus en el medio optimizado, la constataci�n de una alta producci�n de fenoles entre los d�as 2 y 8, y valores elevados de biomasa durante la fase exponencial (d�as 4, 6 y 8), sugiere una secuencia temporal en la que la biomasa se acumula inicialmente, seguida de una intensa actividad metab�lica secundaria que culmina en la producci�n de fenoles. Esta informaci�n es crucial para el dise�o de estrategias de cosecha optimizadas, permitiendo la recuperaci�n selectiva de biomasa y fenoles en los momentos de m�xima concentraci�n.

La comparaci�n con otros estudios en fermentaci�n sumergida resalta la eficiencia del medio optimizado en t�rminos de tiempo de producci�n y rendimiento de metabolitos. En conjunto, estos resultados conclusivos del estudio resaltan el potencial biotecnol�gico de los residuos agroindustriales como sustratos de bajo costo para el cultivo de Pleurotus ostreatus y la producci�n simult�nea de biomasa y compuestos fen�licos. La optimizaci�n del medio, considerando la fuente de carbono, la fuente de nitr�geno y el pH, emerge como una estrategia clave para modular la actividad metab�lica del hongo y dirigir el flujo de carbono hacia la producci�n de los metabolitos deseados. Este enfoque no solo reduce los costos de producci�n al valorizar residuos, sino que tambi�n contribuye a la sostenibilidad ambiental al disminuir la dependencia de medios de cultivo convencionales y reducir la generaci�n de desechos.

 

Referencias

1.      Akter, M., Halawani, R., Ayed, F., y Taleb, A. (2022). Utilization of Agro-Industrial Wastes for the Production of Quality Oyster Mushrooms. Sustainability, 14(2). doi:https://www.mdpi.com/2071-1050/14/2/994

2.      Ar�valo, S. (2016). Optimizaci�n de la producci�n del agente de biocontrol candida sake (CPA-1). In Universitat de Lleida (pp. 1�18). https://acortar.link/9mx25J

3.      Ayşenur, Y., Sibel, Y., Ceyhun, K., y Can, Z. (2016). Total Phenolics, Flavonoids, Tannin Contents and Antioxidant Properties of Pleurotus ostreatus Cultivated on Different Wastes and Sawdust. International Journal of Secondary Metabolite, 4(1), 1�9. https://doi.org/10.21448/ijsm.252052

4.      Beltr�n Delgado, Y., Morris Quevedo, H., Dom�nguez, O. D., Batista Corbal, P., y Llaurad� Maury, G. (2021). Mycochemical composition and antioxidant activity of pleurotus ostreatus mushroom in different growth stages. Acta Biol�gica Colombiana, 26(1), 89�98. https://doi.org/10.15446/abc.v26n1.84519

5.      Bettin, F., Da Rosa, L. O., Montanari, Q., Calloni, R., Gaio, T. A., Malvessi, E., Da Silveira, M. M., y Dillon, A. J. P. (2011). Growth kinetics, production, and characterization of extracellular laccases from Pleurotus sajor-caju PS-2001. Process Biochemistry, 46(3), 758�764. https://doi.org/10.1016/j.procbio.2010.12.002

6.      Chaquilla-Quilca, G., Balandr�n Quintana, R. R., Mendoza-Wilson, A. M., y Mercado-Ruiz, J. N. (2018). Propiedades y posibles aplicaciones de las prote�nas de salvado de trigo. CienciaUAT, 12(2), 137. https://doi.org/10.29059/cienciauat.v12i2.883

7.      Confortin, F. G., Marchetto, R., Bettin, F., Camassola, M., Salvador, M., y Dillon, A. J. P. (2008). Production of Pleurotus sajor-caju strain PS-2001 biomass in submerged culture. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 35(10), 1149�1155. https://doi.org/10.1007/s10295-008-0394-x

8.      Contreras, N., Del Olmo, M., Garc�a, R., y Vidal, G. (2022). Pleurotus Spp., producci�n, cultivo y propiedades. 81-106.� https://acortar.link/jbFKYi

9.      Ferrer-Romero, J. C., Mar�a Mas-Diego, S., Beltr�n-Delgado, Y., Rodr�guez-Quiala, Y., Joaqu�n, H., y Quevedo, M. (2019). Optimization of medium composition for the production of Pleurotus ostreatus biomass and phenols in submerged fermentation with response surface methodology.

10.  Ferrer-Romero, J. C., Mas-Diego, S. M., Beltr�n-Delgado, Y., Morris-Quevedo, J., y D�az-Fern�ndez, U. (2016). Estudio cin�tico de la producci�n de biomasa y compuestos fen�licos por Pleurotus ostreatus en fase sumergida. Scielo.

11.  Fondo de las Naciones Unidas para la Infancia. (2023). Estado Mundial de la Infancia 2023: Para cada infancia, vacunaci�n. Florencia: Centro Mundial de Investigaciones y Estudios Prospectivos.� https://acortar.link/OrGtvd

12.  Guill�n-Navarro, G. K., M�rquez-Rocha, F. J., y S�nchez-V�zquez, J. E. (2014). Producci�n de biomasa y enzimas ligninol�ticas por Pleurotus ostreatus en cultivo sumergido. Revista Iberoamericana de Micolog�a, 15(4), 302�306.

13.  Huang. (2010). Determinaci�n de metabolitos secundarios a partir de la cepa nativa cv15nd aislada del p�ramo cruz verde, Departamento de Cundinamarca. 9(1), 76�99.

14.  Jeannette Nieto, I., y Chegwin A, C. (2010). Influencia del sustrato utilizado para el crecimiento de hongos comestibles sobre sus caracter�sticas nutrace�ticas. Revista Colombiana de Biotecnolog�a, XII(1), 169�178.

15.  Kumar, K. (2020). Nutraceutical Potential and Processing Aspects of Oyster Mushrooms. Current Nutrition y Food Sciencce, 16, 3-14. doi:http://dx.doi.org/10.2174/1573401314666181015111724

16.  Mariano, �. (2015). Manejo B�sico de Statistica 7. 1�11.

17.  Marina, D., Avella, G., Alberto, C., Garc�a, O., y Cisneros, A. M. (2008). Medici�n de Fenoles y Actividad Antioxidante en Malezas Usadas para Alimentaci�n Animal. Simposio de Metrolog�a, 1�5. http://cenam.mx/simposio2008/sm_2008/memorias/M2/SM2008-M220-1108.pdf

18.  Melanouri, E. M., Dedousi, M., y Diamantopoulou, P. (2022). Cultivating Pleurotus ostreatus and Pleurotus eryngii mushroom strains on agro-industrial residues in solid-state fermentation. Part I: Screening for growth, endoglucanase, laccase and biomass production in the colonization phase. Carbon Resources Conversion, 5(1), 61�70. https://doi.org/10.1016/j.crcon.2021.12.004

19.  Mel�ndez, J., Castillo, S., Pe�a, Y., y Y�pez, T. (2015). Degradaci�n de compuestos fen�licos en efluentes simulados por acci�n de la enzima lacasa obtenida a partir del hongo Pleurotus Ostreatus (Degradation of Phenolic compounds in simulated effluents by action of the enzyme laccase obtained from fungus Pleuro.

20.  Mumpuni, A., Ekowati, N., Purnomowati, P., y Purwati, E. S. (2017). Growth and Protein Content Establishment of Pleurotus ostreatus on Liquid and Solid Medium. Biosaintifika: Journal of Biology y Biology Education, 9(3), 572. https://doi.org/10.15294/biosaintifika.v9i3.11660

21.  Navarro, P. (2018). Recuperaci�n de prote�nas del proceso de fabricaci�n de extractos de malta para la elaboraci�n de un concentrado proteico. 93. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/153365

22.  Nieto, J., y Chegwin, C. (2010). Efecto del sustrato en hongos nutrace�ticos169Rev. Colomb. Biotecnol. Vol. XII No. 1 Julio 2010 169-178 169Influencia del sustrato utilizado para el crecimiento de hongos comestibles sobre sus caracter�sticas nutrace�ticas. Revista Colombiana de Biotecnolog�a, 169-178.� https://revistas.unal.edu.co/index.php/biotecnologia/article/view/15631

23.  Organizaci�n de las Naciones Unidas para la Alimentaci�n y la Agricultura; Fondo Internacional de Desarrollo Agr�cola; Fondo de las Naciones Unidas para la Infancia; Programa Mundial de Alimentos; Organizaci�n Mundial de la Salud. (2024). El Estado de la Seguridad Alimentaria y la Nutrici�n en el Mundo. Financiaci�n para acabar con el hambre la inseguridad alimentaria y la malnutrici�n en todas sus formas. Roma.� https://acortar.link/SwEq6q

24.  Organizaci�n de las Naciones Unidas. (2018). Objetivos del Desarrollo Sostenible.� https://acortar.link/QhBzd5

25.  P�rez, B., y Casta�eda, S. (2016). Propagaci�n in vitro de orqu�deas nativas como una contribuci�n para la conservaci�n ex situ. Biotecnolog�a Vegetal, 16(3), 143�151.

26.  Petre, M. (2015). Mushroom Biotechnology: Developments and Applications. In Mushroom Biotechnology: Developments and Applications. Elsevier Inc. https://doi.org/10.1016/C2014-0-03106-1

27.  Ricco, R. A., Agudelo, I. J., y Wagner, M. L. (2015). M�todos empleados en el an�lisis de los polifenoles en un laboratorio de baja complejidad. Lilloa, 52(2), 161�174. http://www.lillo.org.ar/revis/lilloa/2015-52-2/07.pdf

28.  Rodr�guez-Ortiz, G., Garc�a-Aguilar, J. �., Leyva-L�pez, J. C., Ruiz-D�az, C., Enr�quez-Del Valle, J. R., y Santiago-Garc�a, W. (2019). Structural biomass and by compartments of Pinus Patula regeneration in clearcutting sites. Madera y Bosques, 25(1). https://doi.org/10.21829/myb.2019.2511713

29.  Salmones, D. (2018). Pleurotus djamor, un hongo con potencial aplicaci�n biotecnol�gica para el neotr�pico. Scientia Fungorum, 46, 73�85. https://doi.org/10.33885/sf.2017.46.1177

30.  S�nchez, I. (2012). Nutrientes y compuestos bioactivos del trigo: fibra y polifenoles

31.  Serna, C. P., Cadavid, A. S., Armando, A., Vega, S., Alberto, B., y Rojano, R. (2006). Establecimiento de un medio de cultivo sumergido para una cepa nativa de un hongo Poliporal Establishment of a submerged culture medium for a native strain of a Poliporal mushroom. VIII, 5�13.

32.  Tesfay, T., Godifey, T., Mesfin, R., y Kalayu, G. (2020). Evaluation of waste paper for cultivation of oyster mushroom (Pleurotus ostreatus) with some added supplementary materials. AMB Express, 10(1). https://doi.org/10.1186/s13568-020-0945-8

33.  Vamanu, E. (2012). Biological activities of the polysaccharides produced in submerged culture of two edible Pleurotus ostreatus mushrooms. Journal of Biomedicine and Biotechnology, 2012. https://doi.org/10.1155/2012/565974

34.  Varnero Mar�a T, Quiroz Madelaine S,� y �. C. H. (2010). Utilizaci�n de residuos forestales lignocelul�sicos para producci�n del hongo ostra (Pleurotus ostreatus). Informaci�n Tecnol�gica, 21(2), 13�20. https://doi.org/10.1612/inf.tecnol.4154it.09

35.  Vera, M. E. F. (2021). Evaluaci�n de la capacidad antioxidante del hongo ostra (Pleurotus ostreatus).

36.  Zaragoza Monroy, A. R., Moreno Hern�ndez Duque, J. L., Rodr�guez, M. G., y Guevara Lara, F. (2009). An�lisis de los compuestos fen�licos de los hongos comestibles huitlacoche (Ustilago maydis) y setas (Pleurotus ostreatus) y evaluaci�n de algunas de sus posibles propiedades nutrac�uticas. Quinto Congreso Estatal �La Investigaci�n en el Posgrado.�

 

 

 

 

 

� 2025 por el autor. Este art�culo es de acceso abierto y distribuido seg�n los t�rminos y condiciones de la licencia Creative Commons Atribuci�n-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)

(https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/).