Efecto de sustratos orgnicos y porcentaje de humedad en la produccin de conidios de Trichoderma SPP

Effect of organic substrates and percentage of humidity on the production of conidia of Trichoderma SPP

 

Efeito de substratos orgnicos e percentual de umidade na produo de condios de Trichoderma SPP

 

 

Humberto Carlos Gorotiza Mena I
hgorotiza1@utmachala.edu.ec
 https://orcid.org/0000-0009-0002-5038

,Edwin Edison Jaramillo Aguilar II
ejaramillo@utmachala.edu.ec
 https://orcid.org/0000-0002-8241-9598
Leonor Margarita Rivera Intriago III
lrivera@utmachala.edu.ec
  https://orcid.org/0000-0002-8241-9598
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


Correspondencia: hgorotiza1@utmachala.edu.ec

 

 

 

Ciencias Tcnicas y Aplicadas

Artculo de Investigacin

* Recibido: 30 de septiembre de 2023 *Aceptado: 25 de octubre de 2023 * Publicado: 13 de noviembre de 2023

  1. Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Tcnica de Machala, Ecuador.
  2. Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Tcnica de Machala, Ecuador.
  3. Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Tcnica de Machala, Ecuador.
  4. Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Tcnica de Machala, Ecuador.

Resumen

El gnero de hongos filamentosos, conocido como Trichoderma, ha suscitado un creciente inters en la esfera de la agricultura debido a su potencial, tanto como agente de control biolgico, como promotor del crecimiento de plantas. Este inters surge a raz de la necesidad imperante de encontrar alternativas para combatir las enfermedades fngicas, sin poner en peligro la salud humana ni el entorno ambiental. La utilizacin de Trichoderma spp. como una herramienta de control biolgico ha abierto nuevas perspectivas en la agricultura ecolgica. Lo ms destacado de su aplicacin es su capacidad para fomentar prcticas agrcolas sostenibles. Al mismo tiempo, su uso puede reducir la dependencia de pesticidas qumicos, minimizando, de esta manera, los impactos ambientales asociados con su utilizacin. El objetivo de esta investigacin fue evaluar el efecto de los sustratos orgnicos y el porcentaje de humedad en la produccin de conidios de Trichoderma spp. Se emplearon productos agrcolas como el arroz en grano, arrocillo, el maz en grano y el maz molido, a diferentes porcentajes de humedad. Los resultados obtenidos demuestran que los sustratos de arroz grano entero y arrocillo a 30% de humedad obtuvieron los mejores resultados en la produccin de conidios. Este enfoque prometedor puede contribuir significativamente a la agricultura sostenible y al bienestar del medio ambiente.

Palabras Clave: Trichoderma; Fermentacin; Antagonista; Sustrato slido.

 

Abstract

The genus of filamentous fungi, known as Trichoderma, has sparked growing interest in the agricultural sphere due to its potential, both as a biological control agent and as a plant growth promoter. This interest arises from the prevailing need to find alternatives to combat fungal diseases, without endangering human health or the environmental environment. The use of Trichoderma spp. As a biological control tool it has opened new perspectives in organic agriculture. The highlight of its application is its ability to promote sustainable agricultural practices. At the same time, its use can reduce dependence on chemical pesticides, thus minimizing the environmental impacts associated with its use. The objective of this research was to evaluate the effect of organic substrates and the percentage of humidity on the production of conidia of Trichoderma spp. Agricultural products such as grain rice, rice, grain corn and ground corn were used, at different percentages of humidity. The results obtained demonstrate that whole grain rice and rice substrates at 30% humidity obtained the best results in the production of conidia. This promising approach can significantly contribute to sustainable agriculture and environmental well-being.

Keywords: Trichoderma; Fermentation; Antagonist; Solid substrate.

 

Resumo

O gnero de fungos filamentosos, conhecido como Trichoderma, tem despertado crescente interesse no mbito agrcola devido ao seu potencial, tanto como agente de controle biolgico quanto como promotor de crescimento vegetal. Este interesse surge da necessidade prevalecente de encontrar alternativas para combater doenas fngicas, sem colocar em risco a sade humana ou o meio ambiente. O uso de Trichoderma spp. Como ferramenta de controle biolgico abriu novas perspectivas na agricultura orgnica. O destaque da sua aplicao a sua capacidade de promover prticas agrcolas sustentveis. Ao mesmo tempo, a sua utilizao pode reduzir a dependncia de pesticidas qumicos, minimizando assim os impactos ambientais associados sua utilizao. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o efeito de substratos orgnicos e do percentual de umidade na produo de condios de Trichoderma spp. Foram utilizados produtos agrcolas como arroz em gro, arroz, milho em gro e milho modo, em diferentes percentuais de umidade. Os resultados obtidos demonstram que o arroz integral e os substratos de arroz com 30% de umidade obtiveram os melhores resultados na produo de condios. Esta abordagem promissora pode contribuir significativamente para a agricultura sustentvel e o bem-estar ambiental.

Palavras-chave: Tricoderma; Fermentao; Antagonista; Substrato slido.

 

Introduccin

La aplicacin de Trichoderma como un medio de control biolgico ha generado nuevas oportunidades en el mbito de la agricultura ecolgica. (Nur A & Noor A., 2020) Uno de los aspectos ms atractivos del uso de Trichoderma en la agricultura es su potencial para fomentar prcticas agrcolas sostenibles. (Lorito, Woo, Harman, & Monte, 2010), adems destaca que el uso de Trichoderma como agente de control biolgico puede reducir la dependencia de pesticidas qumicos y, por ende, minimizar los impactos ambientales asociados a su uso.

El gnero Trichoderma, que pertenece a la familia Hypocreaceae, se encuentra distribuido ampliamente en todo el mundo y se ubica en diversos hbitats como suelos, madera en descomposicin y materia vegetal en descomposicin. Estos hongos filamentosos muestran una gran diversidad en sus modos de vida y en sus interacciones con otros hongos, animales y plantas. (Tyskiewicz, Nowak, Ozimek, & Jaroszuk-Ścisel, 2022)

La taxonoma de Trichoderma sigue siendo un rea en desarrollo y la diferenciacin de especies es compleja (Mesa-Vanegas, Marin, & Calle-Osorno, 2019). Desde el punto de vista morfolgico, Trichoderma se caracteriza por tener conidiforos delgados y ramificados que se asemejan a pequeos rboles, con mechones densos en forma de anillos y ramas piramidales irregulares que terminan en esporas o conidios asexuales. Adems, producen clamidosporas intercalares y terminales, as como propgulos de tres tipos: hifas, clamidosporas y conidios. Como mecanismo de resistencia, estos hongos pueden formar clamidosporas que se producen en diferentes partes del micelio, incluyendo zonas intermedias y finales del micelio. Estas clamidosporas son consideradas estructuras de supervivencia que pueden perdurar en el tiempo. (Martnez , Infante, & Peteira, 2015)

Es importante destacar que el anlisis basado en la forma y estructura es propenso a errores, y aproximadamente el 50% de las clasificaciones de Trichoderma sp. realizadas mediante este enfoque resultan ser incorrectas. (Hernndez-Fernndez, Prez, & Pieros-Castro, 2018).

La bsqueda de estrategias alternativas para el control de enfermedades fngicas ha sido motivada por la imperante necesidad de incrementar la productividad agrcola sin poner en peligro la salud humana ni el entorno ambiental. (MENA-BAHENA, AYVAR-SERNA, FLORES-YAEZ, & CATALN-LUCENA, 2020). Se estima que el suelo, uno de los hbitats microbianos con mayor biodiversidad en la naturaleza, contiene entre 10 x 104 y 10 x 109 de microorganismos y especies diferentes por gramo de suelo y es la base de la agricultura. Por ello, se han impulsado tecnologas amigables con el medio ambiente como el uso del control biolgico (CB) como parte del manejo integrado de plagas (MIP). (Viera-Arroyo , y otros, 2020). Por lo tanto, Trichoderma se utiliza ampliamente como un biofertilizante en una amplia gama de cultivos agrcolas, ya sea en combinacin con la aplicacin de fertilizantes qumicos o de manera independiente. (Andrade-Hoyos, y otros, 2023)

La importancia del gnero Trichoderma se centra en su destacada eficacia para combatir diversas enfermedades, un hecho que ha sido documentado en mltiples ocasiones. Se ha investigado especficamente su influencia en la prevencin de la pudricin de las races, una problemtica que figura entre las afecciones responsables de considerables prdidas econmicas en diversos cultivos agrcolas. (Antomarchi Obregn, Tamayo Rosales, Guerra Buenao, Mas Diego, & Barrera Antomarchi, 2023) A pesar de que los productos qumicos siguen siendo la principal opcin para enfrentar estas enfermedades, los agentes biolgicos ofrecen una alternativa muy eficiente para controlar de forma ms rpida y segura. (Andrade-Hoyos, y otros, 2019)

Las propiedades antagonistas de Trichoderma contra los hongos patgenos se fundamentan en la activacin de una serie de mecanismos diversos. Estos incluyen la competencia por recursos como nutrientes y espacio, el micoparasitismo, la produccin de sustancias antibiticas, la promocin del crecimiento de las plantas hospedantes y la induccin de respuestas de defensa en las mismas. En el proceso de micoparasitismo, Trichoderma secreta enzimas que descomponen la pared celular de los hongos que parasita, destacndose entre ellas las proteasas, las quitinasas y las glucanasas. Esta accin provoca la retraccin de la membrana plasmtica y la desorganizacin del citoplasma en los hongos afectados. Adems, Trichoderma inhibe la germinacin de esporas y la elongacin del tubo germinativo de los hongos patgenos. (Hernndez-Melchor, Ferrera-Cerrato, & Alarcn, 2019)

La produccin de Trichoderma se puede llevar a cabo de dos maneras: mediante la fermentacin sumergida (en lquido) o mediante la fermentacin en estado slido. Ambos mtodos tienen sus ventajas y desventajas, pero los procesos sumergidos son ms sencillos de manejar y automatizar. En la mayora de las fermentaciones lquidas, la concentracin del sustrato se sita generalmente dentro de un intervalo que va desde un 0,5% hasta un 6%. Esta concentracin especfica depende de factores como la densidad del sustrato y las posibles complicaciones reolgicas que puedan surgir. (Chvez-Garca, y otros, 2008)

Los cultivos sumergidos de Trichoderma spp. se han realizado utilizando el medio Czapek Dox o sus variantes con concentraciones variables de sacarosa (10-30 g/L), as como fuentes de sacarosa como la melaza, y la adicin ocasional de extracto de levadura/peptona extra (1-5 g/L). Estos cultivos han logrado alcanzar concentraciones de peso seco de biomasa de Trichoderma spp. que oscilan entre 2 y 15 g/L en un perodo de cultivo de 4 a 7 das. Mientras que el extracto de malta es comn en otros tipos de cultivos, su aplicacin en cultivos sumergidos de Trichoderma spp. ha sido poco frecuente hasta la fecha.

El presente trabajo de investigacin se plantea como objetivo evaluar el efecto de los sustratos orgnicos y el porcentaje de humedad en la produccin de conidios de Trichoderma spp.

 

Metodologa

  1. Seleccin de Sustratos Orgnicos
    • Se seleccionaron cuatro sustratos orgnicos comunes: arroz en grano, arrocillo, maz en grano y maz partido
    • Se adquirieron los sustratos de proveedores locales y se almacenaron en condiciones adecuadas hasta su uso.
  2. Preparacin de Sustratos Orgnicos
    • Se colocaron los diferentes tratamientos en bolsitas plsticas con 100 gramos cada una, se trabaj en cmara de flujo.
    • Los sustratos se enfriaron a temperatura ambiente antes de su uso.
    • Cada sustrato fue sometido a un proceso de esterilizacin mediante, autoclave a 121C durante 20 minutos.

 

  1. Diseo Experimental
    • Se llev a cabo un diseo completamente al azar (DCA) con 3 repeticiones por tratamiento.
    • Cada tratamiento consisti en la combinacin de un sustrato orgnico especfico y un porcentaje de humedad determinado

 

Tabla 1

Descripcin de los diferentes tratamientos y los porcentajes de humedad

TRATAMIENTOS

 

Arroz grano

Arrocillo

Maz grano

Maz molido

T1

10%

 

 

 

T2

 

10%

 

 

T3

 

 

10%

 

T4

 

 

 

10%

T5

20%

 

 

 

T6

 

20%

 

 

T7

 

 

20%

 

T8

 

 

 

20%

T9

30%

 

 

 

T10

 

30%

 

 

T11

 

 

30%

 

T12

 

 

 

30%

 

  1. Preparacin de Trichoderma spp.
    • El cultivo de Trichoderma spp. se mantuvo en placas de agar PDA (papa-dextrosa-agar) a 25C en incubadora durante 7 das para obtener colonias puras.
    • Se prepararon suspensiones de esporas de Trichoderma spp. mediante la siembra de colonias en frascos de vidrio esterilizados en un medio de cultivo liquido a base de melaza y agua destilada en relacin 1:4.
  2. Inoculacin de Sustratos
    • Se inocul cada sustrato con los diferentes niveles de humedad, con la suspensin de esporas de Trichoderma spp., se asegur una distribucin uniforme.
  3. Condiciones de Cultivo
    • Los sustratos se mantuvieron en condiciones controladas de temperatura 25C y fotoperodo 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.
  4. Variables a medir

         Las variables a medir incluyeron la cantidad de conidios producidos a diferentes porcentajes de humedad.

    • Los tratamientos se evaluaron a los 21 das despus de la inoculacin, para determinar la produccin de conidios de Trichoderma spp.
    • Los sustratos con Trichoderma se homogenizaron y se extrajo un gramo y se lo disolvi en 100 ml de agua destilada, utilizando el agitador magntico.
    • Los conidios se contabilizaron mediante la utilizacin de la cmara de Neubauer, en microscopio ptico.
  1. Anlisis Estadstico
    • En cuanto al anlisis estadstico de los datos, se opt por utilizar la prueba de Kruskal-Wallis, estadstica no paramtrica, con el fin de realizar comparaciones entre las medianas de los diferentes tratamientos. Esta eleccin se fundament ya que los datos no cumplan los supuestos de normalidad en la distribucin de los datos y homogeneidad en la varianza. La prueba de Kruskal Wallis es una alternativa no paramtrica al test de ANOVA para datos no pareados, que emplea rangos para comparar la hiptesis de las muestras obtenidas de una misma poblacin.
    • Se utiliz un nivel de significancia de α = 0.05 para todas las pruebas estadsticas.
  2. Software Estadstico
    • Se utiliz el software Infostat para llevar a cabo los anlisis estadsticos.

 

Resultados y discusin

Al analizar la produccin de conidios de Trichoderma en diversos sustratos slidos y a diferentes porcentajes de humedad, se observaron diferencias estadsticamente significativas entre los distintos tratamientos, como se detalla en la Tabla 1. En trminos generales, el hongo demostr la capacidad de producir conidios en todos los tratamientos estudiados. No obstante, se destacaron de manera significativa los tratamientos 9 y 10, que utilizaron como sustrato el arroz y arrocillo, ya que arrojaron valores notables de produccin de conidios, alcanzando 1.2 x 107 y 1.1 x 107 conidios por gramo de sustrato. Por otro lado, el valor ms bajo en la produccin de conidios se observo en el tratamiento nmero 2 con una produccin de 5.4 x 105.

En un contexto de produccin artesanal, los hongos entomopatgenos cultivados sobre sustrato de arroz en bolsas plsticas han logrado obtener notables rendimientos que se sitan en el rango de 1010 conidios por gramo de sustrato. No obstante, en la mayora de las especies de hongos entomopatgenos, los valores ms habituales de produccin oscilan alrededor de 109 conidios por gramo de sustrato. Estos resultados resaltan la efectividad y el potencial de este mtodo de cultivo, lo cual puede resultar en una produccin considerable de conidios y, por consiguiente, en un aumento en la disponibilidad de agentes de control biolgico para su implementacin en el manejo de plagas agrcolas. (Sahayaraj & Karthick, 2008)

 

Tabla 2

Concentracin de esporas en sustratos slidos evaluados a diferente porcentaje de humedad.

TRATAMIENTO

% HUMEDAD

CONCENTRACIN DE ESPORAS

T 10

30 %

1.2 x 107

T 9

30 %

1.1 x 107

T 6

20 %

6.3 x 106

T 11

30 %

4.4 x 106

T 12

30 %

2.9 x 106

T 5

20 %

2.2 x 106

T 8

20 %

2.0 x 106

T 7

20 %

1.4 x 106

T 4

10 %

7.3 x 105

T 1

10 %

6.8 x 105

T 3

10 %

5.8 x 105

T 2

10 %

5.4 x 105

 

Mediante el anlisis de varianza, prueba de Kruskal wallis, se puede observar que el p-valor de los tratamientos, los valores resultaron ser inferiores al nivel de significancia 5 %, por lo que existen diferencias estadsticas significativas en al menos un tratamiento. La variable produccin de conidios presento el mayor valor en el tratamiento T10 y T9 con 1.2 x 107 y 1.1 x 107 respectivamente; el valor mnimo se encontr en el T2 con 5.4 x105, como se observa en la Tabla 3.

El arroz y arrocillo se destacan como los sustratos de preferencia en la produccin a gran escala de hongos entomopatgenos debido a su capacidad para mantener las condiciones fsicas ideales. Ofrece una superficie efectiva adecuada para el crecimiento micelial, un equilibrio nutricional apropiado y condiciones especficas que se ajustan a los requisitos del aislamiento, incluyendo una ptima aireacin y un contenido de humedad adecuado. (Bhana Prakash, Padmaja, & Siva Kiran, 2008)

 

Tabla 3.

Prueba estadstica

Referencias

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2023 por los autores. Este artculo es de acceso abierto y distribuido segn los trminos y condiciones de la licencia Creative Commons Atribucin-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)

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