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Estudio de la microbiota oral en caninos en la ciudad de Cuenca

 

Study of the oral microbiota in canines in the city of Cuenca

 

Estudo da microbiota oral em caninos na cidade de Cuenca

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Correspondencia: mireya.angamarca.07@est.ucacue.edu.ec

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Ciencias de la Salud.

Art�culo de Investigaci�n.

 

* Recibido: 23 de enero de 2023 *Aceptado: 20 de febrero de 2023 * Publicado: 17 �de marzo de 2023

 

                    I.            Maestr�a en Medicina Veterinaria, Universidad Cat�lica de Cuenca, Ecuador.

                 II.             Maestr�a en Medicina Veterinaria, Universidad Cat�lica de Cuenca, Ecuador.

               III.            Maestr�a en Medicina Veterinaria, Universidad Cat�lica de Cuenca, Ecuador.

Resumen

Objetivo: El objetivo de este estudio fue identificar la poblaci�n de microbiota oral en caninos en el periodo agosto-septiembre 2022. Metodolog�a: Para el estudio se tomaron 60 muestras de la cavidad oral por medio de hisopado de dientes y enc�as en caninos de dos refugios, as� como de tenencia, los cuales se dividieron en tres grupos, 20 pacientes por cada grupo. Las muestras fueron transportadas en tubos con medio de transporte Stuart, para ser sembrados en los medios de cultivo Agar Sangre y CHROMagar espec�fico para bacterias aerobias y anaerobias facultativas y su posterior incubaci�n e identificaci�n en laboratorio. Resultados: De la microbiota aislada el 70% fueron bacterias anaerobias facultativas y el 30% aerobias. Las bacterias que prevalecen son el g�nero Streptococcus tanto en el refugio 1 con 35%, (S. agalactiae, S pyogenes, S grupo viridans), como en el grupo de animales de tenencia con 80% (S. grupo viridans, S. pyogenes) del total de muestras positivas, en el refugio 2 prevalece el g�nero Staphylococcus: (Staphylococcus coagulasa negativa) con 45% de muestras positivas.

Palabras clave: Canino; bacteria; cavidad oral; refugio; tenencia; enfermedad periodontal.

 

Summary

Objective: The objective of this study was to identify the oral microbiota population in canines in the period August-September 2022. Methodology: For the study, 60 samples were taken from the oral cavity by swabbing teeth and gums in canines from two shelters. , as well as possession, which were divided into three groups, 20 patients for each group. The samples were transported in tubes with Stuart transport medium, to be seeded in the culture media Blood Agar and CHROMagar specific for aerobic and facultative anaerobic bacteria and their subsequent incubation and identification in the laboratory. Results: Of the isolated microbiota, 70% were facultative anaerobic bacteria and 30% aerobic. The prevailing bacteria are the genus Streptococcus both in shelter 1 with 35% (S. agalactiae, S pyogenes, S viridans group), and in the group of holding animals with 80% (S. viridans group, S. pyogenes ) of the total number of positive samples, in refuge 2 the genus Staphylococcus prevails: (coagulase-negative Staphylococcus) with 45% of positive samples.

Keywords: Canine; bacterium; oral cavity; shelter; tenure; periodontal disease.

 

 

Resumo

Objetivo: O objetivo deste estudo foi identificar a popula��o da microbiota oral em caninos no per�odo de agosto a setembro de 2022. Metodologia: Para o estudo, foram coletadas 60 amostras da cavidade oral por swab de dentes e gengivas em caninos de dois abrigos. , bem como a posse, que foram divididos em tr�s grupos, 20 pacientes para cada grupo. As amostras foram transportadas em tubos com meio de transporte Stuart, para serem semeadas nos meios de cultura Blood Agar e CHROMagar espec�ficos para bact�rias aer�bicas e anaer�bias facultativas e sua posterior incuba��o e identifica��o em laborat�rio. Resultados: Da microbiota isolada, 70% eram bact�rias anaer�bicas facultativas e 30% aer�bias. As bact�rias predominantes s�o do g�nero Streptococcus tanto no abrigo 1 com 35% (S. agalactiae, S pyogenes, grupo S viridans), quanto no grupo de animais de conten��o com 80% (grupo S. viridans, S. pyogenes ) do total n�mero de amostras positivas, no ref�gio 2 prevalece o g�nero Staphylococcus: (Staphylococcus coagulase-negativo) com 45% das amostras positivas.

Palavras-chave: Canino; bact�ria; cavidade oral; abrigo; posse; Doen�a periodontal.

 

Introducci�n

Al ser la cavidad oral la entrada al sistema digestivo cualquier anormalidad, enfermedad o disfunci�n en esta regi�n tiene capacidad de causar efectos adversos, como las enfermedades periodontales que se observan frecuentemente en caninos y en el que la microbiota oral desempe�a un papel destacado, en el proceso de estas enfermedades y sus posibles consecuencias. A pesar de su importancia, los h�bitats microbianos de la cavidad bucal canina han sido poco estudiados. (Oba, Carroll, Alexander, Valentine, et al., 2021)

Corrales et al., (2019) indican, que los microrganismos de la cavidad oral de los caninos est�n influenciados por el medio ambiente que lo rodea, costumbres del animal, salud de dientes y enc�as, as� como por factores comportamentales que pueden aislar diversas bacterias como parte de la microbiota natural oral o como causante de lesiones orales e infecciones oportunistas.

Considerando as� las posibles infecciones causadas por estos microrganismos en los humanos, a trav�s de mordeduras o contacto durante las pr�cticas de convivencia, adem�s de conocer el riesgo de infecci�n a estas.

Por lo descrito este estudio permiti� determinar las principal microbiota presente en la cavidad oral de caninos de refugio y tenencia, avanzando as� en el conocimiento respecto a los microorganismos presentes en la cavidad oral de caninos.

 

Microbiota oral

La microbiota oral es un ecosistema muy variado de bacterias localizadas en diversas superficies de la cavidad oral en el cual los microorganismos se relacionan entre s� y con los diferentes componentes abi�ticos Cede�o Moreira et al., (2020). Estas relaciones est�n reguladas por una serie de factores denominados determinantes ecol�gicos.

Cuando existe equilibrio entre los microorganismos que constituyen la microbiota oral y los tejidos que forman parte del ecosistema, se utiliza el t�rmino de �eubiosis�. Sin embargo, cuando este equilibrio se rompe, se puede desarrollar una enfermedad, en este caso el t�rmino utilizado es el de �disbiosis� (Sevillano & Eraso, 2013).

 

Desarrollo de la microbiota oral

La cavidad oral del feto en el �tero se encuentra libre de microorganismos, pero al momento del nacimiento se da el inicio de la colonizaci�n, el feto entra en contacto con el canal del parto y la cavidad oral lo hace con �la microbiota del tracto vaginal materno, son estos microorganismos capaces de adherirse a las mucosas y comenzar dicha colonizaci�n en el reci�n nacido (Minaya & Figueroa, 2020).

Ciertos microorganismos no son capaces de adherirse por lo que desaparecen a los d�as, los que s�, se establecen como precursores la microbiota oral, a partir de entonces se produce una sucesi�n continua de microorganismos, unos sustituyen a otros en respuesta a modificaciones de los diferentes ecosistemas, hasta que se consigue un cierto grado de estabilidad en la composici�n de esta microbiota. (Sevillano & Eraso, 2013).

 

Microbiota presente en cavidad oral canina

Los pat�genos orales presentes en los caninos, son una mezcla de microorganismos aerobios y anaerobios. �Las bacterias inicialmente son aerobias y anaerobios facultativos Gram positivas (Streptococcus spp., Actinomyces spp., y Lactobacillus spp.) y Gram negativas (Neisseria spp., Campylobacter spp.) y despu�s son anaerobias Gram positivos y negativos (Peptostreptococcus spp., Fusobacterium spp., Spirochetes entre otros)� (Fern�ndez, 2021).

Negro et al., (2013) indican bacterias aerobias y anaerobias facultativos (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Micrococcus spp., Bacillus spp., Proteus spp., Escherichia spp., Alcaligenes spp. y Pseudomonas spp.) y a g�neros de bacterias anaerobias estrictas (Porphyromonas spp., Fusobacterium spp., Prevotella spp., Peptostreptococcus spp. y Bacteroides spp.).

 

Patolog�as orales del canino

Las enfermedades periodontales (EP) son infecciones causadas por bacterias en la biopel�cula (placa dental) que se forma en las superficies de la cavidad oral, comprenden una variedad de condiciones que afectan la salud del periodonto, los tejidos que rodean y sostienen el diente. (Logan, 2006).

La EP se compone de procesos: gingivitis y periodontitis, provocadas por la alteraci�n de la microbiota oral, generando un aumento de microorganismos pat�genos con respecto a los beneficiosos. Estos, en interacci�n con el hospedero y con los factores de riesgo del paciente, definir�n una presentaci�n cl�nica espec�fica. (Silveyra et al., 2022).

La gingivitis es la etapa inicial y reversible de la enfermedad periodontal, que se presenta con inflamaci�n y enrojecimiento que se limita a la enc�a, dado por la acumulaci�n de placa bacteriana y sarro en la dentadura del perro (Niemiec, 2008).

La periodontitis etapa posterior donde las estructuras de soporte del diente (ligamento periodontal y el hueso alveolar) se destruyen como resultado de la respuesta inflamatoria del hu�sped a la placa dental y pueden provocar una infecci�n odontog�nica y, en �ltima instancia, la p�rdida del diente. En cualquier momento particular, la periodontitis puede ser activa (gingivitis lo suficientemente grave como para provocar la destrucci�n activa del tejido) o inactiva (grado de gingivitis insuficientemente grave como para causar la destrucci�n tisular) (Wallis et al., 2021).

 

Consecuencias de patolog�as periodontales

El inicio de la patogenia la EP es provocada por la biopel�cula microbiana dental combinada con la respuesta inmunoinflamatoria animal, junto con los efectos locales, pueden ocurrir consecuencias sist�micas secundarias a la bacteriemia asociada a la placa dental, afectando tejidos y �rganos distantes (Pineda et al., 2020).

Estudios sugieren la posibilidad de que estas bacterias afecten negativamente los ri�ones y el h�gado, lo que se ha demostrado que conlleva a una disminuci�n de la funci�n en estos �rganos vitales a lo largo del tiempo. Adem�s, tambi�n se ha sugerido que estas bacterias pueden adherirse a v�lvulas card�acas previamente da�adas (es decir, displasias valvulares) y causar endocarditis (Niemiec, 2008).

Pereira dos Santos et al., (2019) en su estudio identificaron una asociaci�n de la EP con la enfermedad cardiaca. Las medidas de prevenci�n, incluida la informaci�n a los propietarios sobre el cuidado de la higiene dental, la dieta adecuada y los tratamientos periodontales profesionales regulares, asociadas con el diagn�stico periodontal temprano y el tratamiento de la enfermedad establecida, pueden contribuir a la longevidad dental y a la disminuci�n de la prevalencia de afecciones sist�micas relevantes.��

 

Transmisi�n de microrganismo de cavidad oral canina al hombre

La transmisi�n de estos microrganismos se da principalmente por mordeduras, las infecciones suelen ser de naturaleza polimicrobiana. Las bacterias aerobias y anaerobias mixtas de la flora bucal del agresor y la flora de la v�ctima se a�slan com�nmente en las infecciones de las heridas por mordedura (Bula & Olcott, 2018).

Entre las bacterias m�s frecuentemente aisladas por mordedura de perros se encuentran: Aerobias como:� Pasteurella spp., Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Neisseris spp., Corynebacterium spp., Moraxella spp., Enterococcus spp., Capnocytophaga canimorsus. Anaerobias: Fusobacterium spp., Porphyromonas spp., Prevotella spp., Propionibacterium spp. Bacteroides spp., Peptostreptococcus spp. (Pardal & Sarmiento, 2021).

 

Metodolog�a

En el desarrollo de la presente investigaci�n se emple� un dise�o no experimental de tipo descriptiva.

La Poblaci�n que se consider� para este estudio fueron animales de dos refugios, as� como de tenencia de la ciudad de Cuenca, con un n�mero de 60 muestras. El levantamiento de informaci�n inicial se realiz� por medio de registro con los siguientes datos: n�mero de muestra, nombre, sexo, raza, grupo etario, dieta, vacunaci�n, desparasitaci�n, grado de enfermedad periodontal, observaciones, considerando como exclusi�n caninos que se encuentren en tratamiento antibi�tico.

La toma de muestras se llev� a cabo de manera aleatoria, mediante hisopos est�riles en enc�as y dientes de cada uno de los caninos, las muestras fueron identificadas y colocadas en tubos de transporte Stuar para su traslado al laboratorio.

Figura 1. Toma de muestra

 

 

 

 

 

 

Muestras tomadas por hisopado en dientes y enc�as

Las muestras se procesaron en el laboratorio de Microbiolog�a de la Carrera de Medicina Veterinaria, de la Universidad Cat�lica de Cuenca, donde se sembraron en cajas Petri con medio de cultivo Agar Sangre y CHROMagar espec�fico para bacterias aerobias y anaerobias facultativos y selladas con cinta parafilm� para su incubaci�n por 24 horas a 38�C y posterior identificaci�n, tanto macrosc�pica de acuerdo a las caracter�sticas de las colonias y conteo de Unidades Formadoras de Colonias (UFC), as� como microsc�pica por medio de tinci�n de Gram para confirmar morfolog�a y afinidad de tinci�n en Gram positivos y negativos.

Figura 2. Muestras en laboratorio

Muestras de hisopado oral en tubos con agar Stuart

 

 

 

 

Figura 3. Siembra de muestras

Siembra de muestras en agar sangre

 

Figura 4. Caracter�sticas macrosc�picas de colonias

Crecimiento de colonias en agar

 

Resultados

Los resultados obtenidos describen las caracter�sticas de la poblaci�n de estudio, la principal microbiota aislada.

Tabla 1. Descripci�n de la poblaci�n de estudio

 

 

Representa las caracter�sticas de la poblaci�n en estudio con sus respectivas frecuencias, la poblaci�n de acuerdo con el sexo muestra que el 58% fueron hembras y el 42% machos. Raza: 75% mestizos y el 25% de diversas razas. Grupo etario: cachorros 30%, j�venes 35%, adultos 22%, Viejos 13%. Dieta: Balanceado 48%, mixta balanceado-alimento preparado 33%, mixta balanceado-suplemento 5%, mixta balanceado-comida casera 8%, comida casera 5%. Grado de enfermedad periodontal: Grado 0: 45%, Grado 1: 25%, Grado 2: 12%, Grado 3: 13%, Grado 4: 5%.

Tabla 2. Bacterias aisladas de la cavidad oral de los caninos

 

 

Microbiota aislada en medio de cultivo agar sangre, frecuencias por grupos de estudio. Refugio 1 55% muestras positivas de las cuales Streptococcus pyogenes prevalece con el 20%. Refugio 2 55% de muestras positivas donde prevalece Staphylococcus coagulasa negativa con 45%. Grupo de tenencia con 85% de positivos, con prevalencia de Streptococcus viridans de 70%.

Tabla 3. Bacterias aisladas de la cavidad oral de los caninos

Microbiota aislada en medio de cultivo CHROMagar, porcentaje de muestras positivas y sus frecuencia por grupo de estudio. Refugio 1 con 25% de muestras positivas aisladas con prevalencia de Enterococcus faecalis de 20%. Refugio 2 con 30% de positivos, prevaleciendo Proteus mirabilis-Enterobacter aerogenes 15%. Tenencia con 20% de muestras positivas con prevalencia de Enterococcus faecalis.

Tabla 4. Unidades formadoras de colonias (UFC)

Refugio	UFC	Media	D. Est�ndar
1	Agar Sangre	226.27 a	86.35
	CHROMagar	157a	95.75
2	Agar Sangre	302ab	147.42
	CHROMagar	698.33 a	505
Tenencia
3	Agar Sangre	480.17b	358.79
	CHROMagar	320.18 a	498.18
Valor p
	UFC Agar Sangre	0.125
	UFC CHROMagar	0.034

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

La tabla representa las UFC media y est�ndar por grupos de estudio y medio de cultivo. Donde en el Grupo 1 se observa una media de 226.27 para AS y 157 para CHROMagar. Grupo 2 con una media 302 en As y 698.33 CHROMagar. Grupo 3 con media de 480.17 para AS y 320.18 para CHROMagar. Con valor p de 0,125 AS y de 0,034 para CHROMagar.

 

 

 

Discusi�n

Esta investigaci�n permiti� describir la microbiota presente en la cavidad oral de caninos de refugios y tenencia, relacionar los hallazgos entre los grupos de estudio y la microbiota identificada.

En la presente investigaci�n la poblaci�n estuvo representada por 35 hembras (58%) y 25 machos (42%). En cuanto a la raza 75% de la poblaci�n fue mestiza y 25% de distintas razas. La mayor�a de las muestras correspondieron a caninos j�venes 35%, seguido por los cachorros 24%, adultos 22% y por viejos 9%.

La dieta que se manten�a en los diferentes grupos se la caracterizo de la siguiente forma: alimento balanceado 48%, mixta balanceado-alimento preparado 33%, mixta balanceado-suplemento 5%, mixta balanceado-comida casera 8%, �nicamente comida casera 5%, no encontr�ndose diferencia estad�stica entre aislamiento de microbiota y la dieta.

As� mismo se determin� que el 55% de la poblaci�n de caninos presento alg�n grado de enfermedad periodontal. Hall�ndose semejanza con investigaciones como, Fernandez,(2004) donde indica que el 57,8% de los animales sometidos a examen cl�nico reportaron enfermedad periodontal y Logan,(2006) que en su investigaci�n reporta datos de varios pa�ses con tasas de prevalencia de la enfermedad periodontal de entre el 60% de los perros examinados, observ�ndose frecuencias similares a la de esta investigaci�n.

Con respecto a los resultados de la microbiota aislada en medio de cultivo agar sangre se puede observar un mayor porcentaje de muestras positivas en el grupo 3 caninos de tenencia con un 85% a comparaci�n de los refugios 1 y 2, donde se observa un 55% en cada grupo respectivamente, pero con una mayor variedad de bacterias aisladas en estos dos grupos.�

En cuanto a la microbiota aislada en el medio CHROMagar se observ� que en refugio 1 el porcentaje de muestras positivas fue de 25%, prevaleciendo Enterococcus faecalis. refugio 2 el 30% de muestra positivas, predominando Proteus miriabilis y caninos de tenencia 20% de muestra positivas, con prevalec�a de Enterococcus faecalis.

De la microbiota aislada en este investigaci�n, se estableci� que el 70% fueron bacteria anaerobias y el 30% aerobias. Las bacterias que predominan en los grupos de este estudio son el g�nero Streptococcus tanto en el refugio 1 con 35%, (S. agalactiae, S pyogenes, S grupo viridans), como en el grupo de animales de tenencia con 70% (S. grupo viridans) del total de muestras positivas, en el refugio 2 prevalece el g�nero Staphylococcus: (Staphylococcus coagulasa negativa) con 45% de muestras positivas. As� el estudio realizado por Corredor & Torres, (2009) indican, que en la cavidad oral se puede aislar m�ltiples especies de microorganismos; la mayor�a corresponde a microbiota transitoria o de paso, quedando como microbiota habitual unas 20 especies y predominando entre ellas la microbiota gran positiva, principalmente Streptococcus del grupo viridans componiendo el 90% de la microbiota oral, debido a que su h�bitat principal es la cavidad oral, colonizando tanto superficies duras como blandas. Cuyos datos son comparables con los obtenidos, al mostrarse en nuestro estudio una alta frecuencia de Streptococcus del grupo viridans (70%), esto en el grupo de caninos de tenencia.

En este estudio se identificaron bacterias como: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus grupo viridans, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus coagulasa negativa, Moraxella spp, Enterobacter aerogenes, Enterococcus faecalis, Proteus miriabilis. Contrastando con Cabrera et al., (2012) donde sus resultados reflejaron que la Neisseria spp. y el Estreptococos α hemol�tico se observaron en el 100% de los animales muestreados, seguido del Staphylococcus coagulasa negativa (90%), Corynebacterium spp. (80%), mientras que el Staphylococcus epidermidis, Proteus miriabilis y el Streptococcus pneumoniae se observaron en un 10% de los animales muestreados. De manera que, comparando los resultados obtenidos por Cabrera con los del presente estudio se observa similitud con la microbiota identificada debido a que se encontr�: Staphylococcus coagulasa negativa (55%), Proteus miriabilis (25%), Streptococcus pneumoniae (5%). Sin embargo, las bacterias Neisseria spp., Streptococos α hemol�tico, Corynebacterium spp., Staphylococcus epidermidis, no se encontraron en el presente estudio.

Negro et al., (2013), en su estudio realizado en caninos con diagn�stico de enfermedad periodontal previa, obtuvieron resultados correspondientes a g�neros de bacterias aerobias y anaerobias facultativos Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Micrococcus spp., Bacillus spp., Proteus spp., Escherichia spp. Enterobacter spp., y Pseudomonas spp., de los cuales concluyen que se encuentran en relaci�n con enfermedad periodontal. Observ�ndose coincidencia con algunos de los g�neros encontrados en nuestro estudio como Staphylococcus spp, Streptococcus spp, Proteus spp., y Enterobacter spp.

Respecto a Staphylococcus aureus que se reporta en los resultados de esta investigaci�n Bierowiec et al.,(2014) indican que su transmisi�n es principalmente por contacto directo entre humanos y animales. No menos importante es la posibilidad de propagar Staphylococcus indirectamente, por medio ambiente contaminado. En investigaciones previas Cadima & Calder�n, (2011) aislaron g�rmenes mediante el cultivo de las heridas por mordedura, aislando con mayor frecuencia Staphylococcus aureus (60%). Ya en el a�o 2006, Mart�nez L. logr� aislar en el 30,8 % Staphylococcus aureus. Si bien el S. aureus forma parte de la flora normal de la piel, es el agente etiol�gico t�pico de una celulitis y que puede encontrarse en heridas profundas de tipo punzante, constituyendo uno de los g�rmenes aerobios m�s frecuentes en las heridas por mordedura. Cuyos estudios concuerdan con nuestro estudio realizado debido a que se encontr� dentro de la microbiota aislada Staphylococcus aureus (20%).

Referente a Moraxella spp, algunos autores como Oba, Carroll, Alexander, Somrak, et al., (2021) se�alan que Moraxella spp., se correlaciona negativamente con EP, predominan en los perros sanos, asoci�ndola con una cavidades orales m�s saludable. As� mismo Oba, Carroll, Alexander, Valentine, et al., (2021) en otra investigaci�n, indican que en los perros, uno de los colonizadores primarios de la superficie dental seria Moraxella, por lo tanto, se espera que una mayor proporci�n de esta bacteria en los h�bitats de placa. Adem�s, Abrahamian & Goldstein, (2011), quienes se�alan en su estudio los g�neros m�s comunes aislados de 50 heridas de mordedura de perro infectadas, indicando que Moxarella spp., no fue de las principalmente bacterias aisladas, mostrando de la m�s bajas frecuencia 10%. Consider�ndose as� que Moxarella spp. aislada en nuestro estudio es un habitante de la microbiota normal de cavidad oral del canino, sin embargo, tambi�n puede estar presente en infecciones por mordeduras.

En cuanto a las Enterobacterias aisladas en esta investigaci�n, Corrales et al., (2019), reportar bacterias del g�nero Enterobacter, que no est�n directamente asociadas con la infecci�n periodontal, pero pueden participar en la creaci�n de un ambiente favorable para su desarrollo, promoviendo as� el mayor crecimiento de pat�genos oportunistas, especialmente anaerobios facultativos intestinales: Escherichia coli, Proteus miriabilis, Enterobacter aerogenes, bacterias Gram positivas como Enterococcus durans y, Enterococcus faecalis. Coincidiendo as� con ciertas bacterias identificadas en nuestro estudio como: Proteus miriabilis, Enterococcus faecalis y Entrobacter aerogenes, sugiriendo que est�n asociados con la flora intestinal de los perros y se a�slan debido a h�bitos que conducen a la contaminaci�n oro-fecal.

Otro estudio de Abdel et al., (2017),� donde se tomaron muestras de 63 caninos, la tasa de aislamiento de E.faecalis en la cavidad oral fue de 3.2%, estos resultados no concuerdan con los encontrados en nuestra� investigaci�n debido a que se encontr� frecuencias m�s alta.

 

Referencias

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