Evaluacin de la remocin de Demanda Qumica y Bioqumica de Oxgeno de lixiviados mediante bacterias rizosfricas de Typha dominguensis
Evaluation of the removal of Chemical and Biochemical Oxygen Demand from leachates by means of rhizospheric bacteria of Typha dominguensis
Avaliao da remoo da Demanda Qumica e Bioqumica de Oxignio de lixiviados por meio de bactrias rizosfricas de Typha dominguensis
Correspondencia: juan.gonzalez@espoch.edu.ec
Ciencias Tcnicas y Aplicadas
Artculo de Investigacin
* Recibido: 23 de mayo de 2022 *Aceptado: 12 de junio de 2022 * Publicado: 29 de julio de 2022
- Magster en Ingeniera Qumica Aplicada de la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, Investigadora de la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador.
- Magster Scientiarum Mencin Microbiologa del Instituto Venezolano de Investigaciones Cientficas, Venezuela, Tcnico Docente e Investigadora de la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador.
- Mster Universitario en Gestin Ambiental y Energtica en las Organizaciones de la Universidad Internacional de la Rioja, Espaa, Profesora a Tiempo Completo de la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador.
Resumen
Se ensay con consorcios microbianos obtenidos de las races de totora procedentes de un humedal artificial de un relleno sanitario (H1) y su sedimento (S1), as como, del agua (H2) y sedimento (S2) de una laguna natural (I), y del agua (H3) y sedimento (S3) de una laguna natural (II). Se bioaumentaron las muestras y se agruparon para formar siete consorcios microbianos en ensayos desde E1 hasta E7. Posteriormente se pusieron en contacto con el lixiviado y se analiz la Demanda Qumica de Oxgeno-DQO (mtodo APHA 5220-D) y la Demanda Bioqumica de Oxgeno-DBO5 (mtodo APHA 5210-B) en tres perodos diferentes: 15, 30 y 45 das; con los resultados obtenidos se aplic un anlisis de varianza tomando como factores a los 7 ensayos y los 3 perodos, evidencindose que el consorcio microbiano ms eficiente en la remocin de la Demanda Qumica de Oxgeno es el E2 con un porcentaje de remocin alrededor del 88% y para la Demanda Bioqumica de Oxgeno es el E4 con cerca de 81%. Tambin se calcul el consumo de los microorganismos del humedal artificial para reducir la Demanda Qumica de Oxgeno tanto para el invierno como para el verano eran similares de aproximadamente de 223 Kg/da; y para la reduccin del Demanda Bioqumica de Oxgeno el consumo de microorganismos es cercano a 16 Kg/da durante el invierno como para el verano.
Palabras clave: Microorganismos rizosfricos; totora; demanda qumica de oxgeno; demanda bioqumica de oxgeno; consorcio microbiano; tratamiento de lixiviado.
Abstract
It was tested with microbial consortia obtained from totora roots from an artificial wetland of a sanitary landfill (H1) and its sediment (S1), as well as from water (H2) and sediment (S2) from a natural lagoon (I), and the water (H3) and sediment (S3) of a natural lagoon (II). Samples were bioaugmented and pooled to form seven microbial consortia in assays E1 through E7. Subsequently, they were put in contact with the leachate and the Chemical Oxygen Demand-COD (APHA 5220-D method) and the Biochemical Oxygen Demand-BOD5 (APHA 5210-B method) were analyzed in three different periods: 15, 30 and 45 days; With the results obtained, an analysis of variance was applied, taking as factors the 7 trials and the 3 periods, showing that the most efficient microbial consortium in the removal of the Chemical Oxygen Demand is E2 with a removal percentage of around 88%. and for Biochemical Oxygen Demand it is E4 with about 81%. The consumption of the artificial wetland microorganisms was also calculated to reduce the Chemical Oxygen Demand for both winter and summer, they were similar at approximately 223 Kg/day; and for the reduction of the Biochemical Oxygen Demand, the consumption of microorganisms is close to 16 Kg/day during the winter as for the summer.
Keywords: Rhizospheric microorganisms; totora; chemical oxygen demand; biochemical oxygen demand; microbial consortium; leachate treatment.
Resumo
Foi testado com consrcios microbianos obtidos de razes de totora de um pntano artificial de um aterro (H1) e seu sedimento (S1), bem como de gua (H2) e sedimento (S2) de uma lagoa natural (I). , e a gua (H3) e o sedimento (S3) de uma lagoa natural (II). As amostras foram bioaumentadas e agrupadas para formar sete consrcios microbianos nos ensaios E1 a E7. Posteriormente, foram colocados em contato com o lixiviado e a Demanda Qumica de Oxignio-DQO (mtodo APHA 5220-D) e a Demanda Bioqumica de Oxignio-DBO5 (mtodo APHA 5210-B) foram analisadas em trs perodos distintos: 15, 30 e 45 dias; Com os resultados obtidos, foi aplicada uma anlise de varincia, tomando como fatores os 7 ensaios e os 3 perodos, mostrando que o consrcio microbiano mais eficiente na remoo da Demanda Qumica de Oxignio o E2 com um percentual de remoo em torno de 88%. para Demanda Bioqumica de Oxignio E4 com cerca de 81%. Tambm foi calculado o consumo de microorganismos de reas midas artificiais para reduzir a Demanda Qumica de Oxignio tanto no inverno quanto no vero, que foram semelhantes em aproximadamente 223 Kg/dia; e para a reduo da Demanda Bioqumica de Oxignio, o consumo de microrganismos prximo a 16 Kg/dia tanto no inverno quanto no vero.
Palavras-chave: Microrganismos da rizosfera; taboa; demanda de oxignio qumico; Demanda de oxignio bioqumico; consrcio microbiano; tratamento do lixiviado.
Introduccin
El crecimiento poblacional en las ciudades ha incrementado la generacin de desechos slidos y tambin su acumulacin en lugares de disposicin final como los rellenos sanitarios municipales donde los procesos de transformacin y transporte de la materia generan lixiviados. (Liu & Wang, 2020).
Estos lquidos provienen de reacciones de diferentes tipos tales como: qumicas, bioqumicas y contienen grandes cantidades de sustancias orgnicas compuesta por elementos como azcares, protenas, aminocidos y cidos grasos. (Yang et al., 2019).
Los lixiviados por su naturaleza provocan impactos ambientales adversos que daan los sistemas naturales, en especial, suelo y agua. (Salgado Bernal et al., 2012).
El relleno sanitario de Baos (Tungurahua-Ecuador) cuenta con una planta de tratamiento de lixiviados con un humedal artificial poblado de Typha dominguensis conocida popularmente como totora que no cumple de manera efectiva con su funcin depuradora. Dicha planta cuenta con un reactor anaerobio de flujo ascendente que reduce la carga orgnica entre 40 a 50%, y el humedal artificial complementa el proceso, el efluente despus de ser tratado por el reactor es vertido con valores altos de la Demanda Qumica de Oxgeno-DQO y Demanda Bioqumica de Oxgeno-DBO. (Ministerio del Ambiente & Saneamiento Ambiental, 2017).
Para mejorar el desempeo de humedales artificiales generalmente se agregan cocteles bacterianos comerciales como Micropan ALFA POBs que son polvos bioactivadores para remediar lixiviados con altos niveles de compuestos orgnicos difciles de degradar.
Tomando en cuenta los altos costos de los productos comerciales usados como bioactivadores para remediar lixiviados, y la necesidad de mejorar el desempeo del humedal utilizando microorganismos rizosfricas obtenidos de las plantas de totora se disminuir la demanda qumica y bioqumica de oxgeno del lixiviado para ser vertido al ambiente de manera segura.
De acuerdo a Salgado Bernal et al., 2012, caracterizaron 58 cepas bacterianas extradas de la rizosfera de plantas hidrfitas para la remocin de materia orgnica de aguas residuales, donde trece cepas aisladas demostraron una remocin de DQO y DBO5 sobre el 50 % de un efluente complejo en 72 horas. Las cepas estudiadas contribuyeron a la remediacin de efluentes al disminuir la materia orgnica.
Mawang et al., en 2021, describen las actinobacterias como potenciales degradadoras de contaminantes por su distribucin cosmopolita en los sedimentos de plantas macrfitas. Estas bacterias degradan polmeros complejos, promueven el reciclaje de compuestos y la produccin de molculas bioactivas. Mediante Bioaumentacin, la capacidad de degradacin de las reas contaminadas se puede mejorar con la introduccin de microorganismos especficos. (Cheng et al., 2021)
J. Quintero, 2014 obtuvo un porcentaje de remocin de DBO5 de 87,7% en un humedal de flujo subsuperficial usando Heliconia Psittacorum, y un porcentaje de remocin de DBO5 de 90,8% del humedal de flujo superficial usando Lenma minor, logrando una alta eficiencia en la remocin de materia orgnica de aguas residuales.
Materiales y Mtodos
Toma de muestras
Se tom muestras de Typha dominguensis del humedal artificial de un relleno sanitario (H1) y su sedimento (S1); del agua (H2) y sedimento (S2) de una laguna natural (I), y del agua (H3) y sedimento (S3) de una laguna natural (II).
Inoculacin de microorganismos procedentes de muestras
Se prepar los medios, agar MacConkey (AMC), agar Papa Dextrosa (PDA) y agar Nutritivo (AN): 50g de AMC + 1l agua destilada; 39g de PDA + 1l agua destilada; 23g de AN + 1l agua destilada.
Preparacin de diluciones
60 ml de agua peptonada al 1% con agua destilada estril y reposada 24 horas.
Se enriqueci las 6 muestras H1, H2, H3, S1, S2 y S3, en botellas, 90 ml cada muestra con 10 ml de solucin peptonada al 1%.
Se prepar diluciones, donde 10-1 es la muestra enriquecida.
Para las siguientes diluciones, en tubo de ensayo se agrega 9 ml de agua destilada estril + 1000 l de la dilucin anterior, para obtener la siguiente dilucin 10-2 y as sucesivamente hasta llegar a 10-5
Inoculacin de diluciones
En cajas Petri con AMC, PDA y AN slido se verti 500 l de las diluciones de cada muestra sobre la superficie del agar.
Se incubaron a una temperatura de 12 - 15 C similar a la que los microorganismos viven en el humedal artificial por 24 horas.
Determinacin Unidades Formadoras de Colonias
Se determin las unidades formadoras de colonias (UFC) de las diluciones 10-5 por cada agar, permiti el recuento de clulas visibles.
Se descart diluciones de muestras en AN ya que sobrepasaron las 300 colonias y no garantizan un UFC/ml confiable.
Bioaumentacin
Se realiz en cmara de aislamiento y flameo con mechero, se tom una cantidad de masa de microorganismos de las colonias anteriormente inoculadas con caractersticas diferentes de acuerdo a la morfologa de las colonias de bacterias, hongos y levaduras de las muestras H1, H2, H3, S1, S2, S3, y se inocularon en zigzag sobre el medio de cultivo solidificado con el mismo agar del cual provienen y se obtuvieron microorganismos puros. Se codific con letras del alfabeto
Ensayos realizados
Se tom una cantidad de masa de microorganismos de las cajas Petri y se disgreg en 18 ml de agua destilada estril.
Figura 1: Ensayos experimentales
Tratamiento |
Composicin de los consorcios para cada tratamiento |
E1 |
Enterobacterias cajas: a hasta l, y diluciones 10-1 a 10-8 de muestra 2 (AMC). (Muestras de 1 a 28) |
E2 |
Levaduras caja (Muestra 32) |
E3 |
Hongos cajas: ll, o, p, w (Muestra 29, 30, 31, 37) |
E4 |
Consorcio 4 ml de ensayos E2, E3, y otras bacterias, en proporcin 1:1:1 |
E5 |
Consorcio con 4 mL de ensayos E1, E2, E3 en proporcin 1:1:1 |
E6 |
Consorcio con 4 mL de ensayos E1, E2, y otras bacterias, en proporcin 1:1:1 |
E7 |
Tratamiento control con lixiviado |
Para los experimentos, se agreg 2 ml de consorcio/200 ml de lixiviado. Se utiliz 600 ml de volumen de lixiviado/consorcio por fecha de anlisis de DQO y DBO5. Los 600 ml se distribuyeron en 3 recipientes de 200 ml, obtenindose 3 por cada fecha de anlisis (9 en total).
Figura 2: Unidades experimentales
Se estableci tres perodos (15, 30 y 35 das) para el anlisis de DQO y DBO5 de los 7 ensayos.
Determinacin concentracin microbiana/consorcio de cada ensayo
La concentracin inicial UFC/ml lixiviado, presente en los consorcios microbianos se cont (cmara de recuento Neubauer) los microorganismos en suspensin de los diferentes tratamientos bajo el microscopio 100X.
Recuento microscpico:
Unidades formadoras de colonias por recuento microscpico
Macro y Micro Morfologa
Por tincin Gram, se tom en cuenta el microorganismo: bacteria, hongo o levadura presente en los medios AMC, PDA.
Prueba de Catalasa en bacterias
Se coloc una pequea cantidad de masa microbiana por placa, se agreg una gota de perxido de hidrgeno, el desprendimiento de oxgeno se elimina en forma de efervescencia es indicativo de Catalasa positiva.
Porcentaje de remocin de Demanda Qumica Oxgeno y Demanda Bioqumica Oxgeno.
Se tom los promedios de repeticiones de todos los ensayos analizados a los 15 y a los 45 das de la investigacin.
E: Eficiencia de remocin de DQO, (%)
DQOi: DQO analizada a los 15 das (mg /L)
DQOf: DQO analizada a los 45 das (mg /L)
La misma ecuacin se aplic para el DBO5.
Anlisis estadstico
Se aplic un tipo modelo experimental factorial mixto con un diseo completamente al azar (DCA), tomando en cuenta 2 factores: Factor 1: Composicin consorcio microbiano (7 grupos: E1 a E7), intersujetos. Factor 2: Tiempo transcurrido, consorcio microbiano en contacto con el lixiviado (15, 30 y 45 das de contacto), intrasujetos.
Variables aleatorias: DQO y DBO5.
Unidades experimentales: 7
Muestras por unidad experimental: 3
Total, de muestras: 21
ANOVA con dos factores diseo mixto a los datos de DQO y DBO5, como factores a los siete tipos de ensayos y los tres tiempos transcurridos.
Se supone distribucin normal de datos (Shapiro-Wilk) y homogeneidad de varianzas (Levene y Mauchly). Para todas las pruebas se toma un nivel de significancia menor a 0,05.
Adicionalmente se analiz medias de las diferentes condiciones a travs de ajustes Post-Hoc de los efectos principales con Bonferroni; para identificar en donde se concentran las diferencias significativas a travs de subgrupos homogneos, interesa detectar los tratamientos significativamente mejores que el ensayo control E7
Resultados y Discusin
Resultados iniciales de Demanda Qumica de Oxgeno y de Demanda Bioqumica de Oxgeno:
Figura 3: Resultados iniciales, DQO y DBO5
Parmetros |
Mtodos |
Muestra 1 (mg/l) |
Muestra 2 (mg/l) |
Muestra 3 (mg/l) |
|
DQO |
APHA 5220-D |
3780,0 |
54,0 |
50,0 |
|
DBO5 |
APHA 5210-B |
3000,0 |
11,8 |
11,0 |
|
La Tabla 2 muestra los resultados iniciales realizados a las muestras 1, 2 y 3 evidencindose los parmetros problemticos de DQO y DBO5.
Resultados de medicin de pH y Temperatura en muestras
Figura 4: Resultados pH y Temperatura
Muestra |
pH |
Temperatura (C) |
Agua destilada |
6,6 |
12,0 |
H1 |
8,8 |
12,2 |
H2 |
9,6 |
12,5 |
H3 |
8,0 |
13,4 |
S1 |
8,8 |
17,3 |
S2 |
9,1 |
17,9 |
S3 |
7,4 |
18,9 |
En la Tabla 3 se observan los resultados de pH y temperatura de las muestras iniciales tiles para replicar el ambiente de su procedencia en laboratorio.
Resultados Determinacin de Unidades Formadoras de Colonias (UFC)
En la Tabla 4 se muestra el resultado del conteo de UFC de las muestras inoculadas en dilucin 10-5 en agar AMC, PDA y AN
Figura 5: Resultados Unidades Formadoras de Colonias
Muestra |
UFC/ml AMC |
UFC/ml PDA |
UFC/ml AN |
H1 |
210000 |
40000 |
1150000,0 |
H2 |
5000 |
155000 |
- |
H3 |
820000 |
140000 |
- |
S1 |
50000 |
255000 |
500000,0 |
S2 |
440000 |
345000 |
- |
S3 |
385000 |
350000 |
- |
Se evidencia gran presencia de UFC por tanto, permiti su aislamiento y magnificacin. Los microorganismos inoculados en AN no se utilizaron para el proceso de Bioaumentacin
Resultados Bioaumentacin de colonias
Conteo de las UFC Bioaumentadas en agar AMC.
Figura 6: Unidades Formadoras de Colonias en AMC
Muestra |
Dilucin |
Cajas Bioaumentadas |
UFC/ml |
H1 |
10-5 |
a |
175x103 |
H1 |
10-5 |
b |
285 x103 |
H1 |
10-5 |
c |
245 x103 |
S3 |
10-5 |
d |
310 x103 |
S3 |
10-5 |
e |
345 x103 |
S3 |
10-5 |
f |
415 x103 |
H2 |
10-5 |
g |
835 x103 |
H2 |
10-5 |
h |
670 x103 |
S1 |
10-5 |
i |
55 x103 |
S1 |
10-5 |
j |
105 x103 |
H3 |
10-5 |
k |
900 x103 |
H3 |
10-5 |
l |
730 x103 |
Conteo de las UFC Bioaumentadas en agar PDA, Las cajas Petri ll, u, v, y, revelaron contaminacin, se volvieron a inocular con la misma nomenclatura, ll1, ll2, u1, u2, v1, v2, y1, y2, y se incluyen en la Tabla 6.
Figura 7: Unidades Formadoras de Colonias en PDA
Muestra |
Dilucin |
Cajas bioaumentadas |
UFC/ml |
H1 |
10-1 |
ll1 |
1300 |
H1 |
10-1 |
ll2 |
600 |
H1 |
10-1 |
o |
1150 |
H2 |
10-1 |
p |
50 |
H3 |
10-1 |
q |
250 |
H3 |
10-1 |
r |
50 |
H3 |
10-1 |
s |
50 |
H3 |
10-2 |
t |
500 |
S1 |
10-1 |
u1 |
6150 |
S1 |
10-1 |
u2 |
10000 |
S1 |
10-1 |
u1 |
6150 |
S1 |
10-1 |
u2 |
10000 |
S2 |
10-1 |
v1 |
7650 |
S2 |
10-1 |
v2 |
7400 |
S3 |
10-1 |
w |
50 |
S3 |
10-3 |
x |
1600 |
H2 |
10-1 |
y1 |
250 |
H2 |
10-1 |
y2 |
350 |
Resultados concentracin microbiana en consorcios por ensayo
Figura 8: Concentracin microbiana por ensayo
Ensayo |
Concentracin consorcios (UFC/ml) |
E1 |
7292812,50 |
E2 |
2328000,00 |
E3 |
301000,00 |
E4 |
3553125,00 |
E5 |
2475250,00 |
E6 |
3660000,00 |
E7 |
2751000,00 |
Otras |
4951000,00 |
Figura 9: Clasificacin microorganismos utilizadas en ensayos
Muestra |
Dilucin |
Medio |
Cajas aisladas |
Cdigo (-20 C) |
Bacteria |
Hongo |
Levadura |
Otro |
H1 |
10-5 |
AMC |
a |
1 |
x |
|
|
|
H1 |
10-5 |
AMC |
b |
2 |
x |
|
|
|
H1 |
10-5 |
AMC |
c |
3 |
x |
|
|
|
S3 |
10-5 |
AMC |
d |
4 |
x |
|
|
|
S3 |
10-5 |
AMC |
e |
5 |
x |
|
|
|
S3 |
10-5 |
AMC |
f |
6 |
x |
|
|
|
H2 |
10-5 |
AMC |
g |
7 |
x |
|
|
|
H2 |
10-5 |
AMC |
h |
8 |
x |
|
|
|
S1 |
10-5 |
AMC |
i |
9 |
x |
|
|
|
S1 |
10-5 |
AMC |
j |
10 |
x |
|
|
|
H3 |
10-5 |
AMC |
k |
11 |
x |
|
|
|
H3 |
10-5 |
AMC |
l |
12 |
x |
|
|
|
H2 |
10-1 |
AMC |
- |
13 |
x |
|
|
|
H2 |
10-2 |
AMC |
- |
14 |
x |
|
|
|
H2 |
10-3 |
AMC |
- |
15 |
x |
|
|
|
H2 |
10-4 |
AMC |
- |
16 |
x |
|
|
|
H2 |
10-5 |
AMC |
- |
17 |
x |
|
|
|
H2 |
10-6 |
AMC |
- |
18 |
x |
|
|
|
H2 |
10-7 |
AMC |
- |
19 |
x |
|
|
|
H2 |
10-8 |
AMC |
- |
20 |
x |
|
|
|
H2 |
10-1 |
AN |
- |
21 |
|
|
|
|
H2 |
10-2 |
AN |
- |
22 |
|
|
|
|
H2 |
10-3 |
AN |
- |
23 |
|
|
|
|
H2 |
10-4 |
AN |
- |
24 |
|
|
|
|
H2 |
10-5 |
AN |
- |
25 |
|
|
|
|
H2 |
10-6 |
AN |
- |
26 |
|
|
|
|
H2 |
10-7 |
AN |
- |
27 |
|
|
|
|
H2 |
10-8 |
AN |
- |
28 |
|
|
|
|
H1 |
10-1 |
PDA |
ll1 |
29 |
|
x |
|
|
H1 |
10-1 |
PDA |
o |
30 |
|
x |
|
|
H2 |
10-1 |
PDA |
p |
31 |
|
x |
|
|
H3 |
10-1 |
PDA |
q |
32 |
|
|
x |
|
H3 |
10-1 |
PDA |
r |
33 |
x |
|
|
|
H3 |
10-1 |
PDA |
s |
34 |
|
|
|
x |
H3 |
10-2 |
PDA |
t |
35 |
x |
|
|
|
H3 |
10-1 |
PDA |
v2 |
36 |
x |
|
|
|
S3 |
10-1 |
PDA |
w |
37 |
|
x |
|
|
S3 |
10-3 |
PDA |
x |
38 |
x |
|
|
|
H2 |
10-1 |
PDA |
y2 |
39 |
x |
|
|
|
H2 |
10-1 |
PDA |
- |
40 |
x |
|
|
|
H2 |
10-2 |
PDA |
- |
41 |
x |
|
|
|
H2 |
10-3 |
PDA |
- |
42 |
x |
|
|
|
H2 |
10-4 |
PDA |
- |
43 |
x |
|
|
|
H2 |
10-5 |
PDA |
- |
44 |
x |
|
|
|
H2 |
10-6 |
PDA |
- |
45 |
x |
|
|
|
H2 |
10-7 |
PDA |
- |
46 |
x |
|
|
|
H2 |
10-8 |
PDA |
- |
47 |
x |
|
|
|
En la Tabla 8, se codific las muestras para congelacin a -20C, se utiliz la codificacin arbiga. Se clasific los microrganismos utilizados en los tratamientos por caja progenitora en: bacteria, hongos y levaduras. Las muestras desde la 21 a la 28 se almacenaron, por esa razn tienen un cdigo, cabe recalcar que no se utilizaron en los tratamientos. La muestra 34 est en la columna otros fue identificada como Actinobacterias, estas son importantes en la descomposicin quitina y celulosa, se evidencia la abundancia microbiana en las muestras tal como lo public Salgado Bernal et al., en 2012.
Figura 10: Morfologa macro y microscpica, clasificacin de microorganismos
Muestra |
Macro morfologa |
Micro morfologa |
Tincin Gram |
Microorganismo |
1 |
I-O-A-S-E |
B |
- |
Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 |
2 |
I-O-R-S-E |
B |
- |
Enterobacter, Klebsiella Escherichia coli ATCC 25922 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Salmonella, Shigella |
3 |
I-O-R-S-E |
B |
- |
E. Coli Escherichia coli ATCC 25922 Pseudomonas Enterococcus faecalis ATCC 29212 Staphylococcus aureus ATCC 25923 |
4 |
I-O-R-S-E |
B |
- |
Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Salmonella, Shigella |
5 |
I-O-A-E |
B |
- |
Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Salmonella, Shigella |
6 |
P-O-A-E |
B |
- |
Salmonella, Shigella Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 |
7 |
P-O-A-E |
B |
- |
Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Salmonella, Shigella |
8 |
R-O-A-S-E |
B |
- |
Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Salmonella, Shigella |
9 |
R-O-S-E |
B |
- |
Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella, Shigella Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 |
10 |
I-O-A-E |
B |
- |
Enterobacter, Klebsiella Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella, Shigella |
11 |
I-O-S-R-E |
B |
- |
Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Proteus mirabilis ATCC 12453 Salmonella, Shigella |
12 |
I-O-S-R-E |
B |
- |
Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Proteus mirabilis ATCC 12453 Salmonella, Shigella |
13 |
P-O-A-E |
B |
- |
Enterobacter, Klebsiella Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella, Shigella |
14 |
P-O-A-E |
C-B |
- |
Enterobacter, Klebsiella Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella, Shigella |
15 |
P-O-A-E |
B |
- |
Enterobacter, Klebsiella Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella, Shigella |
16 |
P-O-A-E |
B |
- |
Enterobacter, Klebsiella Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella, Shigella |
17 |
P-O-A-E |
B |
- |
Enterobacter, Klebsiella Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella, Shigella |
18 |
P-O-A-E |
B |
- |
Enterobacter, Klebsiella Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella, Shigella |
19 |
P-O-A-E |
B |
- |
Enterobacter, Klebsiella Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella, Shigella |
20 |
P-O-A-E |
B |
- |
Enterobacter, Klebsiella Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella, Shigella |
29 |
C-I-O-A-E |
H |
+ |
Hongo Filamantoso Penillicillum sp. |
30 |
C-I-O-A-E |
H |
+ |
Hongo Filamantoso Fusarium sp. |
31 |
C-I-O-A-E |
H |
+ |
Hongo Filamantoso Penillicillum sp. |
32 |
I-O-S-R-Co |
L |
+ |
Rhodotorula mucilaginosa. |
33 |
I-O-S-R-Co |
C |
+ |
Exophiala |
34 |
R-O-A-E |
C |
+ |
Exophiala |
35 |
I-O-S-R-Co |
C |
+ |
Exophiala |
36 |
Ri-O-S-R |
C |
+ |
Aspergillus sp1 |
37 |
C-I-O-A-E |
H |
+ |
Trichoderma sp Trichosporon asteroides |
38 |
Ri-O-S-U |
C |
+ |
Trichosporon asteroides |
39 |
Ri-O-S-Co |
C |
+ |
Bacillus subtilis |
40 |
G-Co-L |
C |
+ |
Trichosporon asteroides |
41 |
P-O-S-E |
C |
+ |
Trichosporon asteroides |
42 |
P-O-S-E |
C |
+ |
Bacillus subtilis |
43 |
P-O-S-E |
C |
+ |
Trichosporon asteroides |
44 |
P-O-S-E |
C |
+ |
Bacillus subtilis |
45 |
P-O-S-E |
C |
+ |
Bacillus subtilis |
46 |
P-O-S-E |
C |
+ |
Trichosporon asteroides |
47 |
P-O-S-E |
C |
+ |
Trichosporon asteroides |
Macromorfologa: Irregular (I), Ondular (O), spero (A), Suave (S), Elevado (E), Reluciente (R), Rizoide (Ri), Puntiforme (P), Granular (G), Lobulada (L), Circular (C), Convexa (Co); Umbonado (U). |
||||
Micromorfologa: Bacilo (B), Coco (C), Hongo (H), Levadura (L) |
La Tabla 9 describe la morfologa macroscpica o de colonia y la morfologa microscpica, as como, la tincin de Gram de cada muestra. Se describen los posibles microorganismos presentes en cada muestra. Se evidencia el predominio de bacterias en las muestras generalmente de formas irregulares, puntiformes y ondulares, similares a encontradas en sedimentos de lagunas naturales. Las muestras de la 21 a la 28 no se tomaron en cuenta para los tratamientos, por lo que, no se analizan y no se incluyen en la tabla
Resultados de remocin de DQO y DBO5
Figura 11: Remocin de Demanda Qumica y Bioqumica Oxgeno a 15 das
Ensayo |
DQO mg/L lixiviado |
DBO5mg/L lixiviado |
||||
R1 |
R2 |
R3 |
R1 |
R2 |
R3 |
|
E1 |
6275,0 |
6345,0 |
6187,0 |
320,0 |
305,0 |
332,0 |
E2 |
6220,0 |
5980,0 |
5863,0 |
295,0 |
265,0 |
301,0 |
E3 |
5665,0 |
5862,0 |
5485,0 |
285,0 |
320,0 |
288,0 |
E4 |
5860,0 |
5671,0 |
5911,0 |
280,0 |
282,0 |
258,0 |
E5 |
5690,0 |
5548,0 |
5736,0 |
295,0 |
270,0 |
286,0 |
E6 |
5380,0 |
5671,0 |
5549,0 |
270,0 |
288,0 |
312,0 |
E7 |
5850,0 |
6130,0 |
5832,0 |
310,0 |
352,0 |
305,0 |
E1-E7= ensayos experimentales R1, R2, R3= repeticiones |
La Tabla 10 muestra los resultados de ensayos de remocin de DQO y DBO5 analizados a los 15 das de iniciada la fase de contacto entre consorcios bacterianos y muestras de lixiviados del humedal artificial, los datos son la referencia de partida en la fase de ensayos de remocin.
Figura 12: Remocin de Demanda Qumica y Bioqumica Oxgeno a 30 das
Ensayo |
DQO mg/l lixiviado |
DBO5mg/l lixiviado |
||||
R1 |
R2 |
R3 |
R1 |
R2 |
R3 |
|
E1 |
2700,0 |
2841,0 |
2652,0 |
112,0 |
103,0 |
120,0 |
E2 |
2666,0 |
2475,0 |
2410,0 |
84,0 |
89,0 |
68,0 |
E3 |
2328,0 |
2185,0 |
2415,0 |
104,0 |
130,0 |
108,0 |
E4 |
2630,0 |
2688,0 |
2487,0 |
90,0 |
71,0 |
95,0 |
E5 |
2680,0 |
2510,0 |
2802,0 |
94,0 |
75,0 |
91,0 |
E6 |
2912,0 |
3223,0 |
3156,0 |
108,0 |
133,0 |
118,0 |
E7 |
2972,0 |
3117,0 |
2914,0 |
104,0 |
127,0 |
84,0 |
E1-E7= ensayos experimentales R1, R2, R3= repeticiones |
La Tabla 11 muestra los resultados de ensayos de remocin de DQO y DBO5 medidos a los 30 das de iniciada la fase de contacto entre consorcios bacterianos y muestras de lixiviados del humedal artificial, si comparamos con la Tabla 10 es clara la reduccin tanto en DQO como en DBO5 convirtindose en un indicativo del proceso de remocin efectivo.
Figura 13: Remocin de Demanda Qumica y Bioqumica Oxgeno a 45 das
Ensayo |
DQO mg/l lixiviado |
DBO5mg/l lixiviado |
||||
R1 |
R2 |
R3 |
R1 |
R2 |
R3 |
|
E1 |
826,0 |
952,0 |
803,0 |
84,0 |
70,0 |
98,0 |
E2 |
838,0 |
690,0 |
679,0 |
76,00 |
82,00 |
62,00 |
E3 |
816,0 |
974,0 |
730,0 |
86,0 |
94,0 |
111,0 |
E4 |
804,0 |
749,0 |
817,0 |
56,00 |
62,00 |
42,00 |
E5 |
822,0 |
888,0 |
702,0 |
68,00 |
64,00 |
53,00 |
E6 |
1047,0 |
1133,0 |
1003,0 |
76,0 |
102,0 |
98,0 |
E7 |
928,0 |
903,0 |
1108,0 |
82,0 |
95,0 |
78,0 |
E1-E7= ensayos experimentales R1, R2, R3= repeticiones |
La Tabla 12 muestra resultados de ensayos de remocin de DQO y DBO5 medidos a los 45 das de iniciada la fase de contacto entre consorcios bacterianos y muestras de lixiviados del humedal artificial, es decir al finalizar la etapa de ensayos de remocin, si comparamos con la Tabla 11 es clara la reduccin tanto en DQO como en DBO5 sin embargo el descenso de los parmetros controlados toma en los ltimos 15 das una dinmica ms lenta, pero sigue siendo efectiva.
Figura 14: Porcentaje de remocin
Ensayo |
DQO (%) |
DBO5 (%) |
E1 |
86,28 |
73,67 |
E2 |
87,78 |
74,45 |
E3 |
85,19 |
67,41 |
E4 |
86,41 |
80,49 |
E5 |
85,79 |
78,26 |
E6 |
80,83 |
68,28 |
E7 |
83,50 |
73,63 |
La Tabla 13 muestra los porcentajes de remocin de DQO y DBO5 por tratamiento, los cuales fueron calculados en base los tiempos de ensayo y valores de la remocin medidos a los 15 y 45 das, tomando como referencia 30 das de perodo de experimentacin. Siendo E2 el que mayor porcentaje de DQO removi y E4 el que mayor porcentaje de DBO removi.
Resultados anlisis estadstico
DQO
Se presenta la tabla siguiente correspondiente al anlisis de la varianza para identificar si existen diferencias significativas entre el tiempo transcurrido de contacto del consorcio microbiano con el lixiviado y la interaccin entre el tiempo con el tratamiento.
Figura 15: Anlisis de la varianza de DQO
Pruebas multivariantea |
|||||
Efecto |
Valor |
F |
gl |
Significancia |
|
Tiempo transcurrido |
Traza de Pillai |
0,996 |
1691,712b |
2,000 |
0,000 |
Lambda de Wilks |
0,004 |
1691,712b |
2,000 |
0,000 |
|
Traza de Hotelling |
260,263 |
1691,712b |
2,000 |
0,000 |
|
Raz mayor de Roy |
260,263 |
1691,712b |
2,000 |
0,000 |
|
Tiempo transcurrido * Tratamiento |
Traza de Pillai |
0,872 |
1,802 |
12,000 |
0,097 |
Lambda de Wilks |
0,306 |
1,753b |
12,000 |
0,112 |
|
Traza de Hotelling |
1,692 |
1,692 |
12,000 |
0,132 |
|
Raz mayor de Roy |
1,215 |
2,834c |
6,000 |
0,051 |
|
a. Diseo: Interseccin + Tratamiento Diseo intrasujetos: Tiempo transcurrido |
|||||
b. Estadstico exacto |
|||||
c. El estadstico es un lmite superior en F que genera un lmite inferior en el nivel de significacin. |
De acuerdo con la informacin de la tabla anterior, existen diferencias significativas entre el tiempo transcurrido de contacto del consorcio microbiano con el lixiviado y la interaccin entre el tiempo con el tratamiento. Esto quiere decir que la optimizacin del humedal de la planta de tratamiento aplicando microorganismos rizosfricas de Typha dominguensis disminuy la DQO del lixiviado. Comprobndose con pruebas de diferencias intrasujetos mostrada a continuacin:
Figura 16: Diferencias intrasujetos, comparaciones por pareja
Comparaciones por parejas |
|||||
(I) tiempo transcurrido |
(J) tiempo transcurrido |
(I-J) |
Sig.b |
95% confianza para diferenciab |
|
Lmite inferior |
Lmite superior |
||||
15 das |
30 das |
3140,333* |
0,000 |
3052,242 |
3228,425 |
45 das |
4976,095* |
0,000 |
4892,887 |
5059,304 |
|
30 das |
15 das |
-3140,333* |
0,000 |
-3228,425 |
-3052,242 |
45 das |
1835,762* |
0,000 |
1735,366 |
1936,157 |
|
45 das |
15 das |
-4976,095* |
0,000 |
-5059,304 |
-4892,887 |
30 das |
-1835,762* |
0,000 |
-1936,157 |
-1735,366 |
|
Se basa en medias marginales estimadas |
|||||
*. La diferencia de medias es significativa en el nivel ,05. |
|||||
b. Ajuste para varias comparaciones: Bonferroni. |
Como se observa en la tabla anterior existen diferencias significativas entre el tiempo transcurrido de contacto del consorcio microbiano con el lixiviado (15, 30 y 45 das) para el parmetro DQO. Adicionalmente se aplic la prueba de HSD Tukey para establecer los subconjuntos homogneos a partir de los tratamientos:
Figura 17: Diferencias Intersujetos de la DQO
HSD Tukeya,b |
|||
Ensayo |
N |
Subconjuntos homogneos |
|
1 |
2 |
||
E3 |
3 |
2940,00 |
|
E5 |
3 |
3042,00 |
|
E4 |
3 |
3068,56 |
|
E2 |
3 |
3091,22 |
|
E6 |
3 |
|
3230,44 |
E1 |
3 |
|
3286,78 |
E7 |
3 |
|
3306,00 |
Significancia |
|
0,368 |
0,168 |
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogneos. Se basa en las medias observadas. |
|||
a. Utiliza el tamao de la muestra de la media armnica = 3,000. |
|||
b. Alfa = ,05. |
Segn los resultados de la tabla 16, los ensayos E3, E5, E4 y E2 fueron significativamente mejores que los obtenidos para el tratamiento control (E7) con el lixiviado a temperatura ambiente para el DQO
DBO5
Se presenta la tabla de anlisis de la varianza para identificar si existen diferencias significativas de DBO5 entre el tiempo transcurrido de contacto del consorcio microbiano con el lixiviado y la interaccin entre el tiempo con el tratamiento.
Figura 18: Anlisis de la varianza de DBO5
Pruebas multivariantea |
|||||
Efecto |
Valor |
F |
gl |
Significancia |
|
Tiempo |
Traza de Pillai |
0,996 |
1691,712b |
2 |
0 |
transcurrido |
Lambda de Wilks |
0,004 |
1691,712b |
2 |
0 |
|
Traza de Hotelling |
260,263 |
1691,712b |
2 |
0 |
|
Raz mayor de Roy |
260,263 |
1691,712b |
2 |
0 |
Tiempo |
Traza de Pillai |
0,872 |
1,802 |
12 |
0,097 |
transcurrido * Tratamiento |
Lambda de Wilks |
0,306 |
1,753b |
12 |
0,112 |
|
Traza de Hotelling |
1,692 |
1,692 |
12 |
0,132 |
|
Raz mayor de Roy |
1,215 |
2,834c |
6 |
0,051 |
a. Diseo: Interseccin + Tratamiento Diseo intrasujetos: Tiempo transcurrido |
|||||
b. Estadstico exacto |
|||||
c. El estadstico es un lmite superior en F que genera un lmite inferior en el nivel de significacin. |
De acuerdo con la Tabla 17, existen diferencias significativas entre el tiempo transcurrido de contacto del consorcio microbiano con el lixiviado, pero no entre la interaccin entre el tiempo con el tratamiento. Es decir, que la optimizacin del humedal de la planta de tratamiento aplicando microorganismos rizosfricas de Typha dominguensis disminuy el DBO5 del lixiviado. Estos resultados se comprueban mediante las pruebas de diferencias intrasujetos mostrada a continuacin:
Como se observa en la tabla anterior existen diferencias significativas entre el tiempo transcurrido de contacto del consorcio microbiano con el lixiviado (15, 30 y 45 das) para el parmetro DBO5. Adicionalmente se aplic la prueba de HSD Tukey para establecer los subconjuntos homogneos a partir de los tratamientos que obtuvieron resultados similares:
Segn los resultados de la tabla anterior, los ensayos E4, E5 y E2 fueron significativamente mejores que los obtenidos para el tratamiento control con el lixiviado a temperatura ambiente (E7) para el parmetro DBO5
Figura 19: Diferencias Intersujetos del DBO5
HSD Tukeya,b |
|||
Ensayo |
N |
Subconjuntos homogneos |
|
1 |
2 |
||
E4 |
3 |
137,33 |
|
E5 |
3 |
144,00 |
|
E2 |
3 |
146,89 |
|
E6 |
3 |
|
167,22 |
E3 |
3 |
|
169,56 |
E7 |
3 |
|
170,78 |
T1 |
3 |
|
171,56 |
Significancia |
|
0,073 |
0,112 |
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogneos. Se basa en las medias observadas. |
|||
a. Utiliza el tamao de la muestra de la media armnica = 3,000. |
|||
b. Alfa = ,05 |
Conclusiones
Se magnific en laboratorio los microorganismos del agua y sedimento de las races de plantas de Typha dominguensis procedentes de un humedal artificial y de dos lagunas naturales en los medios AMC, PDA y AN, obtenindose gran variedad de microorganismos como enterobacterias, hongos, levaduras y actinobacterias las cuales se separaron en consorcios puestos en contacto con lixiviados formando 6 ensayos ms un ensayo testigo (sin consorcios) donde la actividad microbiana promovi la reduccin de DQO y DBO5.
Se evalu la capacidad de los consorcios usados en los ensayos en funcin del tiempo de contacto con el lixiviado (15, 30, 45 d), siendo el E2 el ms eficiente con una remocin de DQO de aproximadamente 736 mg/L y el E4 para el DBO5 con una remocin de cerca de 54 mg/L de acuerdo a los promedios de las tres repeticiones analizadas a los 45 das de contacto.
El consumo por microorganismos es de cerca de 223 Kg/da tanto para invierno como verano, tomando en cuenta la concentracin del E2 para el DQO; y el consumo por microorganismos en el invierno es de 15834 g/da y para el verano 15816 g/da tomando en cuenta la concentracin del E4 para el DBO5.
Estadsticamente se determin que los consorcios ms eficientes para la remocin de DQO y DBO fueron los ensayos E2 (~88%) y el E4 (~81%) respectivamente, conformados por microorganismos Gram positivos.
Referencias
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- Quintero, J. (2014). Evaluacin de humedales artificiales pilotos de fujo horizontal y tipo superficial y subsuperficial para el tratamiento de aguas residuales. Ingenium, 29.
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