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Introducción: El tamizaje metabólico neonatal es un procedimiento preventivo de salud pública que se realiza en los recién nacidos con el fin de identificar precozmente diversas enfermedades metabólicas congénitas que son poco frecuentes, pero pueden ser graves o incluso letales si no se detectan y tratan a tiempo. Objetivo: Ddeterminar el conocimiento del tamizaje neonatal mediante una encuesta a las madres que asisten a un establecimiento de salud del primer nivel de atención de la Provincia de El Oro, Ecuador. Metodología: Estudio con enfoque cuantitativo y un diseño descriptivo transversal, se encuestó a 100 mujeres usuarias de un establecimiento de salud, enfocándose en su conocimiento sobre el tamizaje neonatal, específicamente en enfermedades como hipotiroidismo, galactosemia, fenilcetonuria y la hiperplasia suprarrenal. Resultados: Los hallazgos revelan un conocimiento generalizado sobre la finalidad del tamizaje, aunque existe variabilidad en el entendimiento de las enfermedades específicas que este detecta; la mayoría de las madres reconoce el tamizaje como una herramienta crucial para la detección temprana de trastornos que pueden influir negativamente en el desarrollo del niño, destacando su rol preventivo y la importancia de la intervención médica oportuna. Sin embargo, se identificó un segmento de la población que muestra desconocimiento o confusión respecto a las patologías que el tamizaje busca identificar; la investigación enfatiza el rol de los profesionales de enfermería en la recolección de muestras y en la educación de los padres, resaltando la importancia de la detección temprana y el tratamiento adecuado de enfermedades metabólicas hereditarias. Conclusión: Es esencial reforzar la educación prenatal en el primer nivel de atención para incrementar la conciencia y la participación en el tamizaje neonatal, con el objetivo de mejorar la salud y el bienestar de los recién nacidos.